بررسی اثر سوپرناتانت سلول¬های بنیادی مزانشیمی مایع آمنیوتیک بر میزان ترشح آنزیم‌های دخیل در تجزیه پروتئین‌های آمیلوئید β و کالپین-1 در سلول¬های نوروبلاستومای انسانی رده SH-SY5Y
Abstract
بیماری آلزایمر معمولاً با رسوب خارج سلولی آمیلوئید بتا و تشکیل داخل سلولی کلاف¬های نوروفیبریلاری ایجاد می‌شود. در این مطالعه، ما اثر پاراکرین سلول‌های بنیادی مزانشیمی مایع آمنیوتیک را بر تغییرات آلزایمر در سلول¬های نوروبلاستومای انسانی رده¬ی SH-SY5Y انسان بررسی کردیم.
مواد و روش¬ها: سلول‌های SH-SY5Y به شرح زیر به پنج گروه تقسیم شدند. گروه کنترل، گروه تیمار LPS 1/0 میکروگرم در میلی‌لیتر، گروه تیمار LPS 10 میکروگرم در میلی‌لیتر، گروه تیمار LPS 1/0 میکروگرم در میلی‌لیتر + محیط غنی‌شده و گروه تیمار LPS 10 میکروگرم در میلی‌لیتر + محیط غنی‌شده. سلول¬ها با LPS 1/0 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر LPS به مدت 24 ساعت انکوبه شدند و پس از آن انکوباسیون با محیط غنی‌شده سلول¬های بنیادی مزانشیمی مایع آمنیوتیک برای 24 ساعت بعدی انجام شد. وجود پلاک‌های آمیلوئید بتا با استفاده از رنگ‌آمیزی قرمز-کنگو تایید شد. میزان بقاء و آپوپتوز سلولی با استفاده از روش MTT و روش رنگ آمیزی فلوسیتومتری با فاکتور Annexin-V بررسی شد. سطح نپرلیزین، آنزیم مبدل آنژیوتانسین و ماتریکس متالوپروتئیناز -9 با روش الایزا اندازه‌گیری شد. با استفاده از array PCR، بیان ژن‌های درگیر در نوروژنز اندازه‌گیری شد. میزان بیان ژن کالپین 1 با روش eal time PCR بررسی گردید.
یافته‌ها: تصاویر میکروسکوپی رسوب پلاک‌های آمیلوئید بتا در سلول¬های تیمار شده با LPS 10 میکروگرم در میلی‌لیتر را نشان داد. این رسوبات در گروه LPS 1/0 میکروگرم در میلی‌لیتر بسیار کمتر بود. محیط غنی‌شده سلول¬های بنیادی مایع آمنیوتیک باعث کاهش تغییرات آپوپتوتیک (05/0>p) و افزایش زنده‌مانی سلول¬های SH-SY5Y بعد از تیمار با LPS را نشان داد (05/0> p). کاهش میزان آنزیم¬های نپریلیزین، آنزیم مبدل آنژیوتانسین و ماتریکس متالوپروتئیناز -9 در سلول‌های تحت درمان با LPS مشاهده شد که بعد از تیمار با محیط غنی‌شده حاصل از سلول‌های بنیادی، میزان این آنزیم¬ها افزایش پیدا کرد (05/0> p). بر اساس نتایج PCR array، محیط غنی شده سلول¬های بنیادی آمنیوتیک قابلیت تغییر بیان ژن¬های درگیر در نوروژنز را در گروه تیمار شده با LPS 10 میکروگرم بر میلی‌لیتر نشان داده شد. بر اساس نتایج، بیان ژن¬های موثر در تمایز، مهاجرت، تقسیم سلولی بعد از تیمار سلول¬های آلزایمری با محیط کشت غنی شده افزایش قابل توجهی نشان داد.