تولید و تخلیص دمین آنتی‌بادی D53 علیه FGF7 شناسایی‌شده به روش نمایش فاژی

Abstract

مقدمه: فاکتور رشد فیبروبلاستی 7 (FGF7) یکی از اعضای خانواده‌ی 23 عضوی FGF است که در تکثیر، تمایز، مهاجرت و آنژیوژنز سلول‌های اپی تلیال نقش دارد. FGF7 در اکثر بافت‌های بدن بیان می‌شود و در سرطان‌های وابسته به فیبروبلاست (CAF) به رشد تومورهای سرطانی کمک می‌کند؛ بنابراین مهار فاکتور رشد فیبروبلاستی 7 می‌تواند یکی از راهکارهای درمانی این سرطان‌ها باشد. اهداف: هدف از این مطالعه بررسی تولید، تخلیص و قدرت اتصال دمین آنتی‌بادی (sdAb) D53 علیه FGF7 انسانی شناخته‌شده به روش نمایش فاژی (phage display) است. روش کار:D53 در توالی DNA خود یک کدون پایان (stop codon) دارد که با روش جهش نقطه‌ای به کدون گلوتامین تبدیل شد. توالی اصلاح‌شده در وکتور pGEX-6p-1 کلون شد و وارد سلول‌های E.coli origami گردید. پس از بیان پروتئین، تخلیص به روش کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از رزین گلوتاتیون سفاروز انجام گرفت. بیان و خالص‌سازی دمین آنتی‌بادی تولیدشده با تکنیک‌های SDS-PAGE و وسترن بلات ارزیابی شد و برای بررسی قدرت اتصال دمین آنتی‌بادی به FGF7 از روش الایزا استفاده گردید. درنهایت مدل 3 بعدی دمین آنتی‌بادی ایجاد شد و مطالعات داکینگ مولکولی به‌منظور بررسی برهمکنش‌ها انجام گرفت. یافته‌ها: دمین آنتی‌بادی D53 متصل به GST در سلول باکتریایی تولید شد. باند kDa 40 ظاهرشده در ژل SDS-PAGE و وسترن بلات بیان دمین آنتی‌بادی را اثبات کرد. با استفاده از تکنیک الایزا مشخص شد که sdAb تولیدشده تمایل مناسبی به FGF7 دارد. همچنین داده‌های به‌دست‌آمده از مطالعات داکینگ وجود انواع مختلفی از برهمکنش‌ها مانند هیدروژنی، هیدروفوبیک و یونی را بین D53 و FGF7 نشان داد. نتیجه‌گیری: نتایج به‌دست‌آمده در این مطالعه می‌تواند زمینه را برای تولید دمین آنتی‌بادی‌های جدید علیه FGF7 فراهم کند.