بررسی میزان ترشح TNFα در محیط کشت سلولهای سرطانی MCF7 ترنسداکت شده با وکتور Lenti-CRISPR-HMGB1

Abstract

مقدمه و هدف اپیدرمولایزیس بولوزا (EB) بطور معمول یک بیماری پوستی هتروژن است که حدوداً 500000 نفر در جهان به آن مبتلا هستند. این بیماری با شکنندگی و تاول زدن مزمن پوستی شناخته میشود. HMGB1 پروتئینی است که توسط سلول های ایمنی مانند ماکروفازها و منوسیت ها و دندریتیک سل ها ترشح می شود. این مارکر در مایع تاول های بیماری اپیدرمولایزیس بولوزا به مقدار فراوانی شناسایی شده است. در طی مطالعات مختلف سیستمCRISPR\CAS9 به طور موفقیت آمیزی باعث کاهش معنی دار ترشح پروتئین های گوناگون وسرکوب ژن های انتخابی در محیط آزمایشگاه و بالینی شده است. هدف از انجام این مطالعه بررسی سطح TNFα درمحیط کشت سلولهای ترانسداکت شده MCF7 با ژن سرکوب کننده HMGB1 در محیط آزمایشگاه بود.

مواد و روش کار برای این منظورسلولهای ترانسداکت شده MCF7 که ژن HMGB1 آنها با سیستم کرایسپر سرکوب شده بود در پاساژ ۳ به تعداد ۵۰۰۰ عدد در پیلت های ۶ خانه کشت داده شد. گروه کنترل شامل سلول های MCF7 بدون سرکوب ژن بود. میزانTNFα در محیط کشت این سلولها بعد از 72 ساعت از کشت، توسط کیت الایزا سنجش و داده های بدست آمده با نرم افزار SPSS17 مورد بررسی آماری قرار گرفت. نتایج بر اساس نتایج بدست آمده تیتر TNFα در گروه مورد (سلولهای سرطانی MCF7 ترنسداکت شده با وکتور) 162 pg/mو در گروه شاهد (سلول های MCF7 بدون دستکاری) 862 pg/mlبود. آنالیز آماری نشان از اختلاف فاحش حدود 5 برابر در دو گروه مورد و شاهد داشت و میزان TNFαدر گروه سلولهای سرکوب شده ژن HMGB1 بطور معناداری کمتر از گروه شاهد بود. بحث نتایج این مطالعه نشان داد سرکوب ژن HMGB1 بصورت قابل ملاحظه ای منجر به کاهش بیان پروتئین TNFαدر محیط کشت شد. بنابراین استفاده از متدهای ژن درمانی در مطالعات حیوانی به عنوان درمان موثر بیماری اپیدرمولایزیس بولوزا از طریق سرکوب ژن HMGB1 پیشنهاد میشود.