شناسایی سریع کامپیلوباکترژژونی بروشLAMP (Loop_mediated isothermal DNA amplification) درگوشت طیور
چکیده
بیماریهای ناشی از مواد غذایی یک معضل بین المللی هستند و کامپیلو باکترها نمونه ای از این تهدیدات می باشند این ارگانیسم
های میله ای شکل،غیرهاگزا،متحرک،گرم منفی که متعلق به گروه کامپیلوباکتریاسه میباشند.اهمیت بهداشتی این باکتری بسیار
بالاست چرا که در آزمایشگاههای کشور تشخیص آن بدلیل میکروآئروفیل بودن و نیاز به سیستمهای گازپک نوع c جهت رشد
سبب هزینه های تشخیص بالا می گردد.
هدف:معرفی روش LAMP بعنوان یک روش بسیار سریعتر،دقیقتر،ارزانتر، اختصاصی تر با کاربرد گسترده در آزمایشگاههای
تحقیقاتی،صحرایی جهت تشخیص و شناسایی بدون نیاز به دستگاههای گران قیمت نسبت به PCR و کشت می باشد.
مواد و روش ها: در این مطالعه پس از تایید فنوتیپی باکتری کمپیلوباکتر ژژونی با استفاده از محیط کشت Campylobacter Selective Agar Base رنگ آمیزی گرم، تست اکسیداز و کاتالاز، DNA بروش استاندارد استخراج گردیده و هم واکنش
LAMP با پرایمر های ویژه جنس کمپیلوباکترژژونی بر پایه ی ژن HipO در یک حمام آبگرم صورت گرفت و هم واکنش PCR با
پرایمرهای خارجی واکنش LAMP انجام گردید. و نهایتا محصولات حاصله توسط ژل الکتروفورز و همچنین با استفاده از کدورت
و ماده فلورسانت مورد بررسی قرار گرفتند.
یافته ها:کمپیلوباکترژژونی در محیط کشت اختصاصی کمپیلوباکتر آگار تولید کلونی های کروی،آبکی و خاکستری
نمود.کمپیلوباکتر ژژونی پس از مجاورت با اکسیداز رنگ بنفش تولید نموده و اکسیداز مثبت گزارش شد و در حضور آب اکسیژنه
H2O2 به علت دارا بودن آنزیم کاتالاز در این باکتری حباب اکسیژن تولید شد و کاتالاز مثبت گزارش شد.
واکنش PCR برای این ژن با پرایمرهای اختصاصی خارجی واکنش LAMP انجام شد و نهایتا باند هایی در بازه 033 تا 033 جفت
بازی بصورت نردبانی حاصل گردید.
واکنش LAMP برای این ژن با پرایمرهای اختصاصی انجام شد و که هم از لحاظ تشخیص کدورت چشمی هم از لحاظ تغییر رنگ
توسط رنگ فلورسانت سایبر گرین ونهایتا یک شکل نردبانی جفت بازی در الکتروفروز حاصل گردید.