تعیین اثر اسیدهای چرب لینولئیک اسید بر بیان شاخص های مولکولی متاستازی و رگزایی رده سلولی سرطان معده MKN-45
چکیده
سرطان معده یک بیماری کشنده است که با درگیر کردن بافت معده شناخته می¬شود. تغییرات ژنتیکی در ایجاد سرطان معده نقش مهمی دارد. علاوه بر تغییر در سطح DNA تغییرات در سطح بیان MicroRNA ها نیز در فرآیند پیشرفت سرطان موثر می باشد. با توجه به اینکه رژیم غذایی نقش مهمی در پیشگیری از این بیماری دارد و بررسی¬های اخیر نقش لینولئیک اسید (LA) را در برخی سرطانها را اثبات کرده است. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر لینولئیک اسید بر تغییر میزان بیان MMP-2، Talin-2،VEGF-A ، Angiopoietin-A2 به عنوان ژنهای وابسته به متاستاز و همچنین mir-194, mir-106b ,mir-126 و mir-30 در رده سلولی MKN-45 می باشد.
مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا رده سلولی MKN45 مربوط به سلولهای آدنوکارسینوم معده در محیط کشت RPMI1640 کشت داده شده، سپس با تست MTT دوز موثر LA مشخص گردید و پس از تیمار 24 ساعته سلولها با LA و داروی دوستاکسل تغییرات بیان ژنهای مورد بررسی نسبت به گروه شاهد با روش Real Time PCR اندازه¬گیری شد. به منظور بررسی میزان بیان ژنهای مورد مطالعه، RNA کل سلولهای تیمار شده با غلظت 50 میلی مولار LA استخراج شده و طبق دستورالعمل کیت، cDNA سنتز شده و سپس با روش RT-PCR ارزیابی گردید. در این روش برای اندازه¬گیری بیان microRNA ها و ژن ها از U6 و بتا اکتین به عنوان Housekeeping gene استفاده شد. همچنین از داروی دوستاکسل به عنوان داروی استاندارد درمان سرطان معده در کنار LA استفاده شد.
یافته¬ها: تیمار سلولهای موردنظر با LA موجب تغییرات بیان در ژنهای مورد بررسی شد. براساس نتایج حاصل از مطالعه بیان ژنهای وابسته به متاستاز MMP-2 و Talin-2 در سلولهای تیمار شده در مقایسه با سلولهای تیمار نشده افزایش معناداری پیدا کرد. همچنین بیان mir-194, mir-106b ,mir-126 و mir-30 نیز در سلولهای تیمار شده با LA به طور معنی¬داری کاهش پیدا کرد. به عبارت دیگر LA منجر به تغییر بیان ژنهای دخیل در متاستاز و آنژوژنز گردید.