بررسی امکان تشخیص مولکولی کمپیلوباکتر ژژونی(Campylobacter jejuni) در فراورده های گوشتی
چکیده
کمپیلوباکتر، عمدتاً کمپیلوباکتر کولی و کمپیلوباکتر ژژونی به عنوان شایعترین باکتری عامل گاستروانتریت منتقله از غذا در انسان شناخته شده است. از سوی دیگر تشخیص این باکتری به دلیل میکروآئروفیل بودن آن و نیاز به سیستم های بیهوازی تامین این شرایط، آسان نبوده و وقت گیر و پرهزینه می باشد.
هدف:
هدف از این مطالعه بررسی امکان استفاده از روش مولکولی به عنوان یک روش موثر جانشین برای روش کشت به منظور شناسایی کمپیلوباکتر ژژونی می باشد.
مواد و روش ها:
در این مطالعه تایید فنوتیپی سوش استاندارد کمپیلوباکتر ژژونی با استفاده از محیط کشت Campylobacter Selective Agar Base ، رنگ آمیزی گرم، تست اکسیداز و کاتالازصورت گرفت. طراحی واکنش زنجیره ای پلیمراز بر پایه ی ژن hipO باکتری و با پرایمر های
TCGCATAATAACTTGCAGCCC: forward و
revearse: ATGCTTGCGGTCATGATGGAویژه کمپیلوباکترژژونی صورت گرفت.
جهــت تعیین LOD50 ، رقت های متوالی از باکتری خالص و همچنین آزمونه گوشت آلوده شده به باکتری خالص تهیه گردید و هرکدام از این رقت ها در محیط کشت غنی شده بولتون براث با ۴ تکرار کشت گردید. سپس از این محیط به طور موازی هم به محیط کشت اختصاصی کمپیلوباکترآگار انتقال گردید.
نتایج:
کمپیلوباکترژژونی در محیط کشت اختصاصی کمپیلوباکتر آگار تولید کلونی های خاکستری نمود و اکسیداز و کاتالاز مثبت گزارش شد.
واکنش PCR با پرایمرهای اختصاصی آن انجام شد و نهایتا تک باند ۸۱۲ جفت بازی نشان از تکثیر ژن hipo حاصل گردید.
LOD50 بدست آمده از روش کشت مستقیم کمپیلوباکتر ژژونی 37 CFU و LOD50 در روش مولکولی نیز ، 37 CFU بدست آمد.
بحث:
مقایسه LOD50 های دو روش نشان می دهد که این روش می تواند با حساسیت مشابه روش کشت باکتری را شناسایی نموده و می تواند یک جایگزین مناسب برای روش کشت باشد.