تعیین میزان متیلاسیون ژنهای FOXP3 و CTLA4و ارتباط آن با سطح بیان این ژنها در بیماران مبتلا به بیماری بهجت

Abstract

زمینه و هدف :بیماری بهجت بوسیله آفتهای استوماتیت، التهاب چشمی، زخمهای ژنیتال و ضایعات پوستی مشخص می شود. اگر چه اتیولوژی این بیماری ناشناخته مانده است، واکنش متقابل ژنتیک و فاکتورهای محیطی ممکن است اساس پاتوژنز این بیماری باشد. شواهد مستحکمی وجود دارد که نشان میدهد اپی ژنتیک نیز مثل ژنتیک، نقش حیاتی درپاتوژنز بیماریهای خودایمنی ایفا می کند. متیلاسیون یکی از فاکتورهای اپی ژنتیکی است که به طور گسترده ای مورد مطالعه قرار گرفته است. FOXP3 و CTLA4 دو مارکر مهم برای Treg هستند که یک نقش اساسی در تنظیم پاسخهای ایمنی دارند. هدف از مطالعه حاضر تعیین متیلاسیون DNA، میزان بیان و سطوح سرمی این ژنها بود. روش کار: از همه افراد شرکت کننده نمونه های خون وریدی گرفته شد سپس سلولهای تک هسته ای خون محیطی با استفاده از روش فایکول استخراج گردید. DNA استخراج شده به روش RGDE به طور تصادفی توسط سونیکاسیون به قطعات کوچک تر شکسته شده و با یک آنتی بادی مونوکلونال رسوب گذاری ایمنی گردید. وضعیت متیلاسیون این ژنها به روش MeDIP-qPCR و با استفاده از 108 نمونه خونی بیماران بهجت و افراد سالم بعنوان گروه کنترل مورد ارزیابی قرار گرفت. آنالیز بیانی به روش Real-time PCR انجام شد. نهایتا سطوح سرمی محصولات این دو ژن توسط الایزا تعیین گردید. نتایج: متیلاسیون ژن CTLA4 در گرو بیماران (mean ± SD: 2.85± .0.75) به طور قابل ملاحظه ای بیشتر از گروه نرمال بود mean ± SD: 1.96±.0.72)(P<0.05)).علاوه بر این بیان این ژن در گروه بیمار(mean ± SD:1.74± .0.54)به طور معنی داری کمتر از گروه نرمال بود( mean ± SD:2.40±.0.76)(P<0.001). بیان ژن Foxp3 در گروه بیمار (mean ± SD: 1.79 ± 1.12) یه طور قابل ملاحظه ای کمتر از گروه نرمال بود(mean ± SD: 2.73 ± 1.33) (p <0.05). همچنین متیلاسیون ژن Foxp3 در گروه بیمار( mean ± SD: 2.3 ± 1.16) بیشتر از گروه نرمال بودP>0.05))(mean ± SD: 1.85 ± .59). اما این افزایش از نظر آماری معنی دار نبود. نتیجه گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان داد که کاهش بیان CTLA4 و FOXP3 احتمال دلرد با هیپر متیلاسیون این ژنها مرتبط باشد و می توان می توان آن را یک عامل خطر برای بیماری بهجت در نظر گرفت. برای نشان دادن نقش متیلاسیون DNA در ایجاد این بیماری مطالعات بشتری مورد نیاز است.