بررسی سرکوب بیان ژن VEGF در سلولهای سرطانی MCF7 با سیستم CRISPR\CAS9

Abstract

مقدمه و هدف: ساخت عروق خونی جدید یکی از ملزومات رشد و تهاجم در تومورها است.VEGF از جمله فاکتور های رشدی مهم در انژیوژنزیس است که در ساخت عروق جدید و گسترش شبکه عروقی نقش اساسی دارد. مهندسی ژنوم با استفاده از تکنولوژی CRISPR-Cas9 به طور چشمگیری اثربخشی و سهولت ایجاد تغییرات ژنتیکی هدفمند، را بهبود بخشیده و انقلابی در بسیاری از جنبه های تحقیقات بیولوژیکی و پزشکی در سال های اخیرداشته است. هدف در این مطالعه مهار بیان ژن VEGF با استفاده از سیستم CRISPR/Cas9 در سلولهای سرطانی سینه MCF7 میباشد. مواد و روش ها: این سلولها از ذخیره سلولی دانشکده علوم نوین تهیه شد و بعد از طی مراحل آزمایشگاهی از نظر میزان بیان ژن VEGF با گروه کنترل مقایسه شد. داده های آماری با نرم افزار SPSS 17 و P< 0.05 بررسی شد. وکتور حاوی ژن های VEGF و CRISPR/Cas9 به همراه مارکر GFP و ژن های ویروس لنتی طراحی و سنتز شد.پس از تایید وکتور طراحی شده از سلول های HECK239 برای Pakaging استفاده شد .در نهایت محیط حاوی ویروس در سه زمان 24–48 -72 ساعت جمع آوری شد و بر روی سلول های MCF7 ریخته شد.مراحل PCR بعد از یک هفته انجام گرفت و نتایج بدست آمده با استفاده از نرم افزار SPSS17 مورد بررسی آماری قرار گرفت. نتایج: بر اساس نتایج این طرح میزان بیان VEGF و سلول های سرطانی MCF7 در حالت عادی (گروه شاهد) 27/3 و گروه مورد (سرکوب) این ژن توسط مسیر کریسپر 0.65 بود که به میزان 5 برابر کاهش پیدا کرده بود. این ارقام در بررسی آماری با P<0.05 معنادار گزارش شد. بحث: بر اساس نتایج این مطالعه آزمایشگاهی بنظر میرسد سرکوب بیان ژن VEGF از طریق سیستم کریسپر فرایندی موفق بوده و میتوان در مطالعات حیوانی مورد بررسی بیشتر قرار بگیرد.