بررسی اثر اسکافولد سه بعدی PCLF (poly- caprolactone fumarate) بر رفتار سلولهای بنیادی عصبی مشتق از نواحی زیر بطنی در موش بالغ

Abstract

در این مطالعه اثر اسکافولد سه بعدی pclf بر روی رفتار سلول های بنیادی عصبی جداسازی شده از نواحی زیر بطنی در موش بالغ با تکنیک¬های مختلف مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: در مطالعه حاضر، سلول¬های بنیادی عصبی از نواحی زیر بطنی SVZدر موش بالغ دو ماهه جداسازی شدند.سلول¬ها در سه گروه کنترل ، پلت¬های پوشیده شده با لامینین، و بر روی اسکافولد کشت داده شدند. رنگ آمیزی فلوسایتومتری و ایمنوسیتوشیمی به ترتیب با مارکرهای CD133 و nestin جهت تعیین بنیادی و عصبی بودن سلول¬ها انجام گرفت. سپس سلول¬ها بر روی اسکافولد pclf کشت داده شدند و چسبندگی و ارتباط سلول ها با اسکافولد با میکروسکوپ الکترونی مورد بررسی قرار گرفت.جهت بررسی cell vibillty و تکثیر سلول¬ها در بازه زمانی 1،2،3،7،14و 21 روزه از MTT و فلوسایتومتری با مارکر Ki67 استفاده شد.و در نهایت تمایز سلول¬های بنیادی عصبی به نورون بالغ و گلیا با دو انتی بادی Map2 و GFAP مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: در بررسی با مارکر CD133و Nestin مشخص شد که سلول¬های جداسازی شده از نواحی زیر بطنی در موش بالغ، حدود 80 تا 90%سلول¬های بنیادی عصبی بودند. تصاویر میکروسکوپ الکترونی اسکنینگ نشان داد که سلول¬ها به اسکافولد متصل شده و intraction خوبی با اسکافولد داشتند همچنین سلول ها توانسته بودند با یکدیگر بر روی اسکافولد ارتباط برقرار کنند.در بررسی با تکنیکMTT تکثیر سلولی در گروه های پوشش داده شده با لامینین و بخصوص گروه با اسکافولد افزایش قابل توجهی نسبت به گروه کنترل داشت و در بازه زمانی 7،14و21 اختلاف معنی داری بین سه گروه وجود داشت که این نشان می دهد از روز 7 به بعد اسکافولد بر فعالیت سلولی اثر بیشتری دارد.نتایج تست ki67 منطبق بر نتایج MTT بود. در بررسی تمایز سلولی با انتی¬بادی تمایزی Map2 و GFAP سلول ها بیشتر به آنتی بادی Map2 در مقایسه با حالت نرمال پاسخ داده بودند و به نورون بالغ تمایز پیدا کرده بودند و در بررسی با آنتی بادی GFAP ، پاسخ سلول ها به این آنتی بادی در مقایسه با گروه کنترل کاهش پیدا کرده بود و درصد کمتری به آستروسیت ها تمایز پیدا کرده بودند که این نشان می¬دهد اسکافولد pclf سلول های بنیادی عصبی را بیشتر به سمت نورون بالغ می¬برد.