اثر عصاره استخراج شده از پرده آمنیون بر آسیب سلولی ناشی از هیپوکسی در رده سلولی H9c2

Abstract

هدف از این مطالعه بررسی اثرات محافظتی پروتئین¬های استخراج شده از پرده آمنیون (AMPs) در برابر آسیب ناشی از هیپوکسی در رده سلولی قلبی H9c2 می¬باشد. روش¬ها: AMPs از جفت¬های تهیه شده از بخش سزارین و به روش مکانیکی استخراج شد. سپس، سلول¬های قلبی H9c2 پس از درمان باAMPs ، تحت شرایط هیپوکسی 24 ساعته به منظور ایجاد آسیب قرار گرفتند. رشد و آسیب سلولی با استفاده از MTT وLDH بررسی گردید. تکثیر سلولی با اندازه گیری بیان پروتئین Ki67 انجام شد. بیان فاکتور شبه هسته‌ای ۲ مشتق از اریتروئید-۲ (Nrf2)، گيرنده فعال كننده¬ي تكثير پروكسي زومی گاما (PPARγ)، پروتئین گروه Box-1 با تحرک بالا (HMGB-1)، و پروتئین مرتبط با پاسخ اولیه تمایز میلوئیدی-88 (Myd88) به روش qPCRو ایمونوبلاتینگ تعیین شد. پتانسیل غشای میتوکندری (ΔΨm) توسط رنگ¬آمیزی JC-1 و میزان آپوپتوز سلول¬های تیمار شده با استفاده از Annexin-V مورد بررسی قرار گرفت. میزان تولید گونه¬های واکنش پذیر اکسیژنی (ROS)، تغییرات Ca2+ و پیری القا شده به ترتیب با استفاده از رنگ آمیزی DCFH-DA، Fluo3-AM و بتا-گالاکتوزیداز در سلول¬ها مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‏ها: تیمار با AMPs همراه با افزایش رشد سلولی، مهار LDH و افزایش بیان پروتئین Ki67 در سلولهایH9c2 در شرایط هیپوکسی بود. بعلاوه اثرات محافظتی AMPs با کاهش در آپوپتوز، مقادیر ROS، Ca2+ و پیری سلول مشاهده شد و این درحالی بود که ΔΨm افزایش یافته بود.. همچنین تیمار سلولها با AMPsمنجر به کاهش بیانHMGB1 و Myd88 و افزایش بیان Nrf2و PPARγ در شرایط هیپوکسی شده بود.