سرکوب بیان ژن ZEB2 به‌وسیله RNA کوچک مداخله‌گر (siRNA) و بررسی اثر آن بر ویژگی‌های زیستی رده‌ی سلولی لوسمیک انسانی HL-60

Abstract

در این مطالعه ما به بررسی نقش ZEB2 از طریق سرکوب بیان ZEB2 توسط siRNA اختصاصی آن و بررسی تأثیر آن بر پروتئین ها و microRNA های دخیل در EMT ازجمله P53, SNAIL1, miR-200c و miR-34a در رده سلولی لوسمی پرومیلوسیتی حاد (HL-60) پرداختیم. مواد و روش ها: سلول‌های HL-60 با دوز اپتیمم از siRNA ZEB2 ترانسفکت شدند. بیان نسبی ZEB2, P53, SNAIL1, miR-200c و miR-34a با استفاده از qRT-PCR اندازه‌گیری شد. از تکنیک آزمایشگاهی MTT برای تعیین تاثیرات سایتوتوکسیک سرکوب ZEB2 و از فلوسیتومتری با استفاده از رنگ‌آمیزی annexin –FITC/PI جهت ارزیابی درصد سلول‌های آپوپتوز شده استفاده شد. یافته‌ها: در این مطالعه مشخص شد siRNA اختصاصی علیه ZEB2 به‌طور مؤثری باعث مهار بیان ZEB2 می گردد و همچنین دارای اثر سایتوتوکسیک روی سلول‌های HL-60 بود. این نتیجه در راستای نتایج بررسی آپوپتوزتوسط تکنیک فلوسیتومتری بود. همچنین مشاهده شد ناک داون ژن ZEB2 منجر به افزایش بیان قابل‌ملاحظه ژن P53 و microRNA های سرکوب‌کننده تومور miR-200c و miR-34a می‌شود. همچنین کاهش بیان ZEB2 با کاهش معنادار در بیان ژن SNAIL1 همراه بود.