طراحی و تهیه سازه ژنی جهت بیان فیوژن پروتئین GLP2R_Teduglutide در سیستم باکتریایی
چکیده
مقدمه: دارویTeduglutide نقش کلیدی را در درمان سندرم روده کوتاه (SBS) ایفا می کند. این دارو که آنالوگ هورمون پپتید شبه گلوکاگونی نوع 2 (GLP2) می باشد، به صورت نوترکیب تولید می شود. جهت انجام مطالعات ساختاری در آینده، مطالعه حاضر بر آن است تا پروتئین حاوی گیرنده GLP2 و دارویTeduglutide که توسط لینکر(GGS) 4 به هم متصل شده اند، را تولید و تخلیص کند.
اهداف: در این مطالعه ابتدا سازه ژنی کد کننده Teduglutide متصل به ناحیه N–ترمینال گیرنده GLP2تهیه شده و سپس به صورت نوترکیب در باکتریEcoli BL21 تولید و در نهایت به صورت دارویTeduglutide متصل به گیرنده GLP2 (GLP2R) تخلیص می شود.
روش کار: توالی هایDNA کد کننده مربوط به داروی پلی پپتید Teduglutide و ناحیه ی N ترمینال GLP2R که توسط لینکر به هم وصل شده بودند مشخص و تهیه شد. این توالی در وکتور بیانی pGEX-2T کلون شده و فیوژن پروتئین مورد نظر با استفاده از باکتریEcoli BL21 به صورت متصل به گلوتاتیون S-ترانسفراز (GST) تولید و با استفاده از رزین گلوتاتیون-سفارز تخلیص شد. روند بیان و تخلیص پروتئین با کمکSDS-PAGE بررسی و تکنیک وسترن بلات جهت تایید بیان پروتئین بکار گرفته شد.
یافته ها: در این پژوهش پروتئین نوترکیب حاوی توالی ناحیه یN-terminal GLP2R و توالی دارویTeduglutide که توسط لینکر بهم متصل شده بودند به طور موفقیت آمیزی تولید و تخلیص شد. نتایج نشانگر یک باند در ناحیه ی حدود 50 کیلو دالتون روی ژل SDS-PAGE بود که مربوط به فیوژن پروتئین GLP2R-Teduglutide متصل به GST است. آنالیز وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضدGST تولید آن را تایید کرد.
نتیجه گیری: در پژوهش حاضر پروتئین نوترکیب GLP2R-Teduglutide در سیستم باکتریایی تولید و تخلیص شد و با کمک تکنیک های مختلفی مورد تایید قرار گرفت. پروتئین تولید شده می تواند برای بررسی های ساختاری جهت تعیین نحوه برهم‌کنش بین Teduglutide و GLP2R مورد استفاده قرار گیرد.