بررسی تولید، تخلیص وتوانایی اتصال آنتی بادی تک زنجیره ایJ43 ضد TNF- α شناسایی شده به روش نمایش فاژی

Abstract

مقدمه: TNF-α به صورت طبیعی در تنظیم پاسخ های ایمنی شرکت دارد. با این وجود مقادیر افزایش یافته ی این سایتوکاین در بروز بیماری های خود ایمنی مثل آرتریت روماتوئید نقش دارد. بنابرین در این موارد مهار TNF-α می تواند جزو روش های درمانی باشد. اهداف: هدف از این مطالعه بررسی تولید، تخلیص و توانایی اتصال آنتی بادی تک زنجیره ای J43 ضد TNF-α است که به روش نمایش فاژی شناسایی شده است. روش کار: J43 در توالی DNA خود یک کدون پایان دارد که با روش جهش نقطه ای به کدون تیروزین تبدیل شد. توالی اصلاح شده در وکتور pET28a کلون شد و وارد E.coli Bl21 plysS گردید. سپس تخلیص به روش کروماتوگرافی تمایلی با استفاده از ستون نیکل-سفاروز انجام گرفت. ارزیابی بیان و تخلیص scFv تولید شده با تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات انجام شد و برای بررسی تمایل اتصال آنتی بادی به TNF-α از روش الایزا استفاده گردید. همچنین تکنیک MTT جهت بررسی اثرات مهاری J43 روی فعالیت TNF-α به کار گرفته شد و در نهایت مطالعات داکینگ، با نرم افزار Z-dock انجام گرفت. یافته ها: آنتی بادی تک زنجیره ای J43 در سیستم بیانی باکتریایی تولید شد. باند پروتئین ظاهر شده در kDa 25 در ژل SDS-PAGE با scFv مورد نظر مطابقت داشت که نتایج تست وسترن بلات هم این موضوع را اثبات کرد. با استفاده از تکنیک الایزا مشخص شد که scFv تولید شده تمایل مناسبی به TNF-α دارد. همچنین داده های به دست آمده از مطالعات داکینگ وجود انواع مختلفی از پیوند ها مثل باند های هیدروژنی را بین J43 و TNF-α نشان داد. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده در این مطالعه می تواند زمینه را برای طراحی آنتی بادی های تک زنجیره ای جدید علیه TNF-α فراهم کند.