طراحی و ساخت وکتور بیانی تولید کننده فیوژن پروتئین نوترکیب انسانی IGF-I پایدار و کلونینگ آن در باکتری E.coli

Abstract

مقدمه: پروتئین IGF-I توسط سلول های کبدی تولید شده و منجر به اثرات آنابولیک می گردد. بیان این پروتئین در برخی از بیماری های متابولیکی دچار اختلال شده و جایگزین نمودن آن توسط داروی نوترکیب می تواند مفید باشد. این دارو با نام ژنریک مکاسرمین در بیماری هایی همچون سندروم لارون، سيروز كبدي بزرگسالان، aging ، بيماري هاي قلبي عروقي و بيماري هاي عصبي کاربرد دارد. اهداف: هدف از این مطالعه طراحی سازه بیانی جهت تولید IGF-I به صورت محلول و کلونینگ آن در باکتری E.Coli می باشد. روش کار: در ابتدا توالی های کد کننده داروی پروتئینی IGF-I به توالی های پروتئین های محلول ساز به کمک لینکر متصل گردید. محلولیت توالی طراحی شده توسط سرور PROSO II مورد ارزیابی قرار گرفته و بالاترین میزان محلولیت با کمترین تعداد اسید آمینه به کار رفته انتخاب شد. در ادامه توالی های پروموتور، اپراتور Lac ، RBS و ترمیناتور مناسب تعبیه گردید. توالی کاست بیانی کدکننده فیوژن پروتئین مد نظر بعد از کلونینگ در Backbone وکتور بیانی pET-22b به باکتری E.Coli Origami جهت بیان، ترنسفورم گردید. سپس القا بیان پروتئین IGF-I در باکتری های ترنسفورم شده به وسیله IPTG، انجام پذیرفت؛ در ادامه بیان پروتئین پس از انجام SDS-PAGE و رنگ آمیزی نیترات نقره مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: با توجه به اینکه در بافر استخراج هیچگونه ماده دترجانتی به عنوان عامل افزایش دهنده محلولیت استفاده نشده است، وجود باند در حوالی 40 کیلو دالتون در باکتری های القا شده نسبت به کنترل می تواند دلیل بر موفقیت آمیز بودن استراتژی های اتخاذ شده در این تحقیق در راستای تولید پروتئین IGF-I محلول در باکتری E.Coli باشد. نتیجه گیری: استفاده توام از استراتژهای طراحی کاست بیانی به همراه انتخاب سویه مناسب از باکتری E.Coli و شرایط مناسب القا بیان پروتئین جهت محلول سازی پروتئین نوترکیب ضروری می باشد.