بررسی تولید، تخلیص و توانایی اتصال آنتی بادی تک زنجیره ای J48 ضد TNF- α شناسایی شده به روش نمایش فاژی

Abstract

مقدمه: TNFα سایتوکاین التهابی و مسئول بروز پاسخ های التهابی است. طراحی آنتی بادی های با سایز کوچکتر و توانایی اتصال قویتر از استراتژی های رایج برای مهار TNFα در بیماری های مزمن می باشد. هدف: هدف از این مطالعه، تولید و تخلیص آنتی بادی ScFv J48 و ارزیابی توانایی اتصال و مهار TNFα و نیز بررسی واکنش های احتمالی بین آن ها با استفاده از مطالعات داکینگ می باشد. روش ها: کدون پایان موجود در CDR2 توالی J48 ، با جهش نقطه ای به کدون اسید آمینه ی نرمال تبدیل شد. توالی درون وکتور بیانی (pET28a) کلون و سپس به باکتری E. coli Bl21 plysS منتقل شد. آنتی بادی با کروماتوگرافی تمایلی تخلیص و بیان پروتئین توسط SDS-PAGE کنترل شد. از تکنیک وسترن بلات برای شناسایی پروتئین ، از تکنیک های الایزا و MTT برای ارزیابی قدرت اتصال J48 به TNFα و مهار اثرات آن و از مطالعات داکینگ جهت بررسی واکنش های بین آن ها استفاده شد. یافته ها: آنتی بادی ScFv J48 در سلول های باکتری بیان شد. باند kDa 25 ای در آنالیز SDS-PAGE و همچنین آنالیز وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد دنباله ی هیستیدینی، بیان آنتی بادی J48 را اثبات کرد. نتایج الایزا و MTT نشان داد که J48 توانایی اتصال بالایی به TNFα دارد و می تواند اثرات سلول کشی TNFα را مهار کند. نتایج داکینگ نشان دهنده باندهای هیدروژنی، هیدروفوبیک است که در برهم کنش بین J48 و TNFα درگیر هستند. نتیجه گیری: J48 فعالیت مهاری خوبی روی TNFα دارد. این آنتی بادی کوچکتر از آنتی بادی کامل است و تولید صنعتی آن با هزینه کمتری نسبت به آنتی بادی های کامل صورت می گیرد. بنابراین J48 می تواند کاندید مناسبی برای کارآزمایی های بالینی یا طراحی داروهای ضد TNFα باشد.