تاثیر خاموش کردن ژن Akt-1 و Jak-1 روی آنژیوژنز، تکثیر و آپوپتوز سرطان سلول سنگفرشی سر و گردن؛ invivo وinvitro
Abstract
سرطان سلول سنگفرشی سر و گردن (HNSCC) یکی از شایع ترین علل مرگ و میر و ناتوانی در جهان است. درمان های بهینه از جمله جراحی، شیمی درمانی و اشعه درمانی میزان بقا را در دهه های گذشته افزایش نداده است. هدف از این مطالعه یافتن راهبردهای درمانی جدید بود که مولکول های مهم در مسیر HNSCC را مورد هدف قرار می دهد. ژنهایAkt1 و Jak1 نقش کلیدی در آپوپتوز و تکثیر بسیاری از سرطان ها دارند. در این مطالعه، رده های سلول های HNSCC (HN5) و سلول های اندوتلیال (HUVEC) با RNA های کوچک مداخله گر (siRNA) درمان شدند. تکثیر سلولی با استفاده از روش MTS و آپوپتوز توسط فکس فلوسایتومتری و 4'-6-دیامیدین-2-فنیلیندول (DAPI) بررسی شد. بیان ژن ها و پروتئین های مرتبط با آن با تستهای ELISA و Real Time-PCR ارزیابی شدند. کاهش بیان در گروه درمانی Akt1 / Jak1 بیشترین بود اما در گروههای درمان شده با Akt1/Jak1، Akt1/Cisplatin و Akt1/Jak1/Cisplatin نیز اختلاف معنی داری وجود نداشت. در تست ELISA در رده سلولی HN5، بیشترین کاهش در گروه درمان شده با siRNA Akt1 مشاهده شد. در آزمایش Jak1 ELISA ، گروه درمان شده با Akt1 / Jak1 siRNA بیشترین کاهش بیان پروتئین Jak1 را در سلول های HUVEC و در رده سلولی HN5، گروه Jak1 / cisplatin بیشترین کاهش را دربیان پروتئین JAK1نشان دادند. درصد تقسیم سلولی پس از درمان با Jak1 / Cisplatin در سلول های HN5 به 64.94% کاهش یافت. در سلول HUVEC، درصد سلول های زنده پس از درمان با Akt1 / Jak1 / Cisplatin به میزان 80.54٪ کاهش یافت. درمان HN5 با Jak1 /Cisplatin درصد سلولهای آپوپتوتیک را به میزان چشمگیری افزایش داد (96.5%). در رده سلولی HUVEC، گروه درمان شده با Akt1/Jak1 siRNA میزان سلولهای آپوپتوتیک را به 5.31% رساند. در مطالعه invivo، در بیست موش شش هفته ای (n=5) با حل کردن 50 میکرولیتر 4NQO در آب آشامیدنی به صورت دوره 120 روزه (3 بار در هفته)،HNSCC القا شد. تریق داخل تومورال siRNA-Hiperfect با دوز تجمعی 2nmol از siRNA و 360 میکروگرم از Hiperfect انجام پذیرفت. اندازه تومور در همه موشهای درمان شده با siRNA کاهش یافت اما بیشترین کاهش در موشهای درمان شده با Akt1 siRNA مشاهده شد)3±0.3.(ویژگی های هیستوپاتولوژی بدخیمی در این گروه نیز حداقل بود. در مجموع، استفاده از siRNA مربوط به Akt1 و Jak1 بدون توجه به مصرف سیس پلاتین میزان آپوپتوز را افزایش و میزان تکثیر سلولی را کاهش داد.