اثر خاموش كردن ژن‌هاي Rock (1,2) بر روي تهاجم و تكثير در سرطان سلول سنگفرشي دهان در مدل حيواني
Abstract
کارسینوم سلول سنگفرشی دهان (OSCC) به عنوان ششمین سرطان رایج در جهان، یک مشکل سلامت عمومی قابل توجه محسوب می شود. به دلیل پاسخ ناکامل به درمان های رایج و همچنین با در نظر گرفتن اینکه هیچ انکوژن منفردی برای OSCC شناسایی نشده است، نیاز مبرم برای یافتن اهداف و بیومارکر های جدید برای مداخلات درمانی احساس می شود.
(Rho associated kinase) ROCKیک پروتئین عمل کننده (effector)اصلی نقش بسیار مهمی در تهاجم و متاستاز ایفا می کند. بیان بیش از حد ROCK به صورت یک انکوژن پرو متاستاتیک در بسیاری از تومورهای توپر از جمله سرطان کبد، پستان و کولون دیده شده است .
با توجه به عوارض متعدد درمان های متداول SCCمانند شیمی درمانی و رادیوتراپی، مهار این بیماری از طریق ژن تراپی ROCK می تواند منجر به کاهش عوارض جانبی، افزایش طول عمر و بهبود کیفیت زندگی بیماران شود. هدف از این مطالعه بررسی اثرROCK1 SiRNAو اثرROCK2 SiRNA برروی تکثیر و تهاجم اسکواموس سل کارسینومای سروگردن می باشد.
مواد و روش کار:
در بخش آزمایشگاهی این مطالعه تست MTS و Real time PCR برای بررسی میزان اثر siRNA مربوط به ROCK 1 و ROCK 2 روی رده ی سلولی سرطانی HN5 وBEAS-2B آزمایش های مختلفی انجام شد. گروههای مطالعه شامل siRNA ژن های ROCK1، ROCK2، ROCK 1+ROCK 2 ، ROCK 1 + cisplatin ، ROCK 2 + cisplatin و
ROCK 1 + ROCK2 + cisplatin بود. گروه های کنترل شامل رده ی سلولی اپیتلیال نرمال (BEAS-2B) و رده ی سلولی سرطانی (HNS) بدون تیمار بود. siRNA بعد از گذشت 24 ساعت از انتقال و جایگذاری سلول ها به میکروپلیت ها اضافه شد و تست های آزمایشگاهی بعد از گذشت 48 ساعت روی سلول ها اعمال شد.
در بخش مطالعات حیوانی نیز از 4NQO به عنوان ماده ی شیمیائی کارسینوژن مورد اعتماد استفاده شد. موش ها پس از 120 روز تیماری کشته شده و زبانشان خارج گردید.siRNA ها نیز با هدف گذاری ROCK(1,2) توسط Hiperfect در مطالعات سلولی و حیوانی مورد استفاده قرار گرفتند.
یافته ها:
موفقیت آمیز بودن خاموشی ژن ROCK1 و ROCK2 با یافته های حاصل از Real time PCR تایید شد.پرولیفراسیون سلولی در تست MTS در تمامی گروه های درمانی دارای اختلاف معنا داری نسبت به گروه کنترل بود (P<0.05). پایین ترین میزان پرولیفراسیون سلولی مربوط به گروه های درمانی siRNA Rock2+cisplatin و siRNA Rock1+Rock2+cisplatin بود.
در مطالعات میکروسکوپی از نمونه های تیماری و کنترل ، گروه کنترل یک SCC خوب تمایز یافته مشاهده شد. شدت اتیپی سلولی مانند هایپر کروماتیسم و کراتین سازی انفرادی سلول ها در گروه کنترل بیش تر از تیمار بود.
نتیجه گیری:
با غیر فعال کردن ژن ROCK1 و ROCK 2 توسط siRNA می توان ویژگی های بدخیمی سلول از جمله پرولیفراسیون و تهاجم را در نمونه های آزمایشگاهی و حیوانی کاهش داد.