بهینه سازی و معتبر سازی روش HPLC برای شناسایی و تعیین مقدار همزمان کوجیک اسید دی پالمیتات و کوجیک اسید

Abstract

مقدمه کوجیک اسید(KA) و کوجیک اسید دی پالمیتات(KADP) در فرآورده های موضعی ضد لک پوستی استفاده می شوند. اعتقاد بر این است که ملح دی پالمیتات دارو پایداری بهتری دارد. بنابراین دستیابی به روشی صحیح و دقیق که قادر به شناسایی و ارزیابی ادعای برچسب و همچنین پایداری اینگونه فرآورده ها باشد، مهم است.هدف ارائه روش HPLC برای شناسایی، جداسازی و تعیین مقدار کوجیک اسید و کوجیک اسید دی پالمیتات به طور همزمان روش کار در کار پژوهشی حاضر، از دستگاه HPLC از نوعKANUER مجهز به دتکتور UV تک کاناله و ستون از نوع C18 به طول 100mm و قطر داخلی 4.60mm و اندازه ذرات 3 میکرومتر استفاده شد. فاز متحرکی متشکل از 40درصد فاز غیر آبی و 60درصد فاز آلی با سرعت جریان 1میلی لیتر در دقیقه به کار گرفته شد. طول موج دتکتور UV262 نانومتر و دمای ستون 4درجه سانتیگراد بود . روش آنالیز طبق دستورالعمل ICH Q2 (R1)معتبرسازی شد.یافته ها در این روش دو داروی مورد مطالعه به طور همزمان در مدت 6 دقیقه با شویش ایزوکراتیک و دتکتور UV جداسازی شدند.. متد از نظر دقت، صحت و خطی بودن معتبر سازی شد و نتایج حاکی از محدوده خطی بین 5/2 تا 40 µg/ml برای KAو 50 تا 400 µg/ml برای KADP می باشد و حداقل حد تعیین مقدار و حد تشخیص برای KA به ترتیب برابر با µg/ml 7/2 و µg/ml 87/0 و برای KADP به ترتیب µg/ml 93/35 و µg/ml 9/11 میباشد. بررسی پیک ها توسط دتکتور PDA نشان از خلوص پیک ها داشت و موید اختصاصی بودن روش بود.نتیجه گیری در این مطالعه روشی ارایه شد که می تواند به طور همزمان دو ماده قطبی و غیر قطبی را شناسایی و تعیین مقدار کند که منجر به کاهش قابل توجهی در زمان آنالیز نسبت به آنالیز هر ماده به صورت جداگانه گردید., Introduction Kojic acid (KA) and kojic acid dipalmitate (KADP) are topical therapeutic agents used in hyperpigmentation treatment. It is believed that dipalmitate salt of the drug has improved stabillity compared to the base. Thus it is important to achieve a precise and accurate method to be able to identify and assess the labeling claims as well as stability of such products.Aim The aim of this study was the simultaneous separation and quantification of both KA and KADP using a simple HPLC methodMaterials and Method In the present study, simultaneous identification and quantification of KA and KADP was performed using HPLC coupled with UV. The KANUER HPLC device was equipped with a single-channel UV detector and a C18 column of 100mm in length and an internal diameter of 4.60mm and a particle size of 3m. The mobile phase was made up of tetrahydrofuran, methanol, acetonitrile, deionized water and acetic acid at a flow rate of 1 ml/min. The wavelength of the UV detector was kept at 262 nm and the column temperature was maintained at 4°C. The method was validated according to the ICH instruction.Results In this method, KA and KADP were isolated simultaneously in 6 minutes with isocratic elution and UV detection.In accordance with the principles of polarity, KA , which is a polar molecule, has a great tendency to move out rapidly with the mobile phase, and then KADP, a very non-polar agent, has a great interest to be adsorbed to the stationary phase. The method was validated with regard to precision, accuracy , linearity, and the accuracy. A linear range of 2.5 to 40 g/ml for KA and 50 to 400 g/ml for KADP, and the limit of detection and the limit of quantification for KA was calculated as 2.7 g/ml and 0.87 g/ml and for KADP as 93.35 g/ml and 11.9 g/ml. PDA analysis revealed and confirmed the specificity of the HPLC method.Conclusion In this study a simple, fast, precise and economically feasible method was presented. This method involves the use of the most common column (ODS) in HPLC and an isocratic mobile phase with a single-channel UV detector. In this method, both polar and nonpolar materials can simultaneously be detected and determined which resulted in a significant reduction in the time of analysis compared to the time required to analyze each material separately.