توسعه ی یک روش حساس HPLC برای تعیین مقدار سیلیبینین در نمونه های درون تن و برون تن

Abstract

مقدمه سیلیبینین یک ترکیب طبیعی است که به عنوان یک آنتی اکسیدان قوی شناخته شده است و همچنین نشان داده شده است که سیلیبینین فعالیت ضدسرطانی علیه سرطانهای ریه، سینه، کولون، کبد، پروستات و کلیه را داراست. محدودیت اصلی استفاده بالینيِ سیلیبینین در درمان سرطان، محلولیت آبی ضعیف، جذب خوراکی پایین و متابولیسم گسترده کبدی این ترکیب است که فراهمی زیستی و اثرات درمانی آن را کاهش می دهد.هدف در این پروژه یک روش حساس کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا (HPLC) برای آنالیز کمی سیلیبینین در نمونه های برون تن ارائه شده تا با استفاده از این روش میزان داروی سیلیبینین را در فرمولاسیون های مختلف تعیین مقدار شود.روش کار ما در این مطالعه، متود خود را با استفاده از دستگاه HPLC و ستون C18 این دستگاه به عنوان فاز ساکن و نیز مخلوط 90% متانول و 10% به عنوان فاز متحرک، توسعه دادیم. محلول های مورد استفاده با رقیق سازی محلول استوک در غلظت های بین 10 تا 100 میکروگرم آماده شد که هرکدام از این غلظت ها در میکروتیوب های 2 میلی لیتری تهیه شده و در دستگاه تزریق شد. روش مورد نظر با توجه به گایدلاین های FDA معتبرسازی شد.نتایج نمودار کالیبراسیون بر اساس ارتفاع پیک های حاصل از تزریق غلظتهای مختلف ارزیابی شد و روش توسعه یافته، در غلظت های بین 10 تا 100 میکروگرم بر میلی لیتر برای نمونه های آبی حالت خطی با ضریب همبستگی 996/0 را نشان داد. زمان بازداری (Retention Time) در حد 97/2 دقیقه بود و دقت و صحت روش نیز در بازه ی مورد قبول 88% تا 105.9% بدست آمد. نتیجه گیری نتایج به دست آمده بیانگر این است که روش توسعه یافته، می تواند متدی سریع و دقیق برای تعیین مقدار سیلیبینین در نمونه های آبی باشد.کلمات کلیدی کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا (HPLC), Introduction Silibinin is a natural compound known as an antioxidant agent and, has shown significant anticancer effects in various pre-clinical cancer models including that of lung, breast, colorectal, skin, liver, prostate and kidney cancer. Despite the anticancer effects of silibinin in preclinical studies, there are some problems in clinical use of silibinin. The main limitation for the clinical uses of silibinin is poor and erratic bioavailability due to low solubility, poor oral absorption and extensive hepatic metabolismAim In this study we developed a simple and accurate high performance liquid chromatography (HPLC) method for quantification of silibinin in aqueous samples by which could be used to quantification of silibinin in different formulations.Method We applied HPLC set, C18 column as stationary phase and the mixture of methanol (90%) and water (10%) as mobile phase. Working solutions were prepared everyday by serial dilution of stock solution to make specific concentrations ranged between 10 g/ml to 100 g/ml. Each of working solution was prepared in 2ml micro tubes and then was injected to the system. The developed method was validated by Food and Drug administration (FDA) guideline.Results The calibration curve was drawn according to different concentrations peak heights. The established method demonstrated a linear range between 10 to 100 µg/ml for aqueous samples with a correlation coefficient of 0.996. The accuracy and precision (inter-day and intra-day) of the developed method was in the range of 88-105.9% for aqueous samples.Conclusion These results demonstrate that developed method is a fast and accurate method for quantification of silibinin in aqueous samples.