تهیه و مطالعه اثرات آنتی تومورال نانوذرات آلبومین سرم انسانی بارگذاری شده با جوگلان و هدفمند شده به گیرنده LHRH روی رده های سلولی T47D و SKOV3

Abstract

خلاصه فارسیمقدمه جوگلان یک ترکیب طبیعی گیاهی است که در بخش های مختلف گردو وجود دارد و دارای اثرات آنتی تومورال است.هدف در این مطالعه نانوذرات HSA بارگذاری شده با جوگلان و هدفمند شده با LHRH تهیه و اثرات آنتی تومورال آنها مورد بررسی قرار گرفت. روش کار برهمکنش جوگلان با آلبومین مطالعه و سپس نانوذرات آلبومین بر اساس روش نامحلول سازی تقویت شده تهیه گردید. بعد از تهیه نانوذرات BSA بارگذاری شده با جوگلان فعالیت آنتی تومورال آنها روی دو رده سلولی A431 و HT29 مورد ارزیابی قرار گرفت. در آخر نانوذرات HSA بارگذاری شده با جوگلان و هدفمند شده با LHRH تهیه گردید. سمیت سلولی نانوذرات هدفمند شده روی سلول های T47D و SKOV3 که به ترتیب LHRH مثبت و منفی می باشند، بررسی شد. نتایج شدت فلورسانس آلبومین در حضور جوگلان با مکانیسم خاموشی استاتیک کاهش می یابد. پیوند های هیدروژنی و اندروالس نیروهای پایدار کننده کمپلکس بوده و نتایج داکینگ مولکولی جایگاه IA را به عنوان جایگاه اتصال جوگلان پیشنهاد کرد. نانوذرات با استفاده از یک دستگاه برای کنترل اضافه کردن اتانول تهیه و استفاده از EDC باعث کاهش زمان مورد نیاز برای تهیه نانوذرات شد. افزایش سمیت سلولی نانوذرات BSA بارگذاری شده با جوگلان در هر دو رده در مقایسه با جوگلان آزاد و نانوذرات BSA مشاهده شد. در سلول های سرطانی مورد مطالعه، اختلافی در جذب نانوذرات هدفمند شده و نشده دیده نشد. سمیت سلولی نانوذرات هدفمند شده در سلولهای حاوی گیرنده LHRH بعد از گذشت 24 ساعت بیشتر از نانوذرات هدفمند نشده بود.بحث اتصال جوگلان موجب تغییرات ساختاری جزئی در پروتئین شده و با استفاده از روش نامحلول سازی تقویت شده نانوذرات آلبومین با اندازه 100 نانومتر تهیه گردید. نانوذرات آلبومین می تواند به عنوان یک حامل مناسب و بی خطر برای دارورسانی جوگلان مورد استفاده قرار گیرد., Introduction As a natural phytochemical compound, juglone present in different parts of walnut and shows antitumuoral activity.Aim In this study juglone–loaded HSA nanoparticles targeted with LHRH peptide (jug-HSA-LHRH NPs) was prepared and evaluated for their anti-tumoural activity.Methods The interaction between juglone and albumin was investigated and then, albumin nanoparticles were prepared based on an improved desolvation method. After preparation of juglone-loaded BSA nanoparticles, their anti-tumoural activity was evaluated on A431 and HT29 cells. Finally, juglone-loaded HSA nanoparticles (jug-HSA NPs) were prepared and targeted with LHRH. The anti-tumoural activity of jug-HSA-LHRH NPs was evaluated on T47D and SKOV3 cells as LHRH receptor positive and negative cells, respectively.Results The fluorescence intensity of albumin was decreased in the presence of juglone by a static quenching mechanism. Van der Waals force and hydrogen bonding were the forces stabilizing the formation of complex and molecular docking results suggest IA site as the binding site. The nanoparticles preparation was simplified by using an apparatus for controlling the addition of ethanol and by using EDC, the time required for nanoparticles preparation was reduced to 3h. The enhanced cytotoxicity of juglone-loaded BSA nanoparticles was observed in both cell lines when compared to the free juglone and also BSA nanoparticles. The results did not show any differences between the uptake of targeted and non-targeted nanoparticles in the studied cancer cell lines. However, the cytotoxicity of the LHRH targeted nanoparticles on the LHRH receptor positive cells were higher than that of non-targeted nanoparticles after 24 h of exposure.Discussion Binding of juglone induces minimum conformational changes in protein. By using improved desolvation method, albumin nanoparticles of size around 100 nm were obtained. Albumin nanoparticles could be successfully used as a suitable and safe carrier for delivery of juglone.