بررسی میل ترکیبی و برهمکنش دمین آنتی بادی I44 با فاکتور نکروز دهنده توموری آلفای انسانی

Abstract

مقدمه: فاکتور نکروزدهنده توموری انسانی (TNF-α) نقشی کلیدی در پاتوژنز بیماری های خودایمنی ایفا می کند. داروهای ضد TNF رایج بدلیل برخی عوارض جانبی محدودیت هایی دارند؛ بنابراین شناسایی داروهای جدید با عوارض کمتر ضروری به نظر می رسد. هدف: هدف در این پروژه تخلیص دمین آنتی بادی I44 شناسایی شده و ارزیابی های بیولوژیک به منظور تعیین تمایل آنتی بادی به TNF-α می باشد که می تواند در بهینه سازی و طراحی آنتی بادی های قوی تر متصل شونده به TNF-α بکار رود.

روش ها: ژن کدکننده آنتی بادی I44 به باکتری E.coli Origami وارد و بصورت سیستم متصل شده به دنباله ی هیستیدین در شرایط بهینه بیان گردید و توسط ستون نیکل- سفارز تخلیص انجام شد. روند بیان و تخلیص پروتئین با کمک SDS-PAGE بررسی و تکنیک وسترن بلات جهت تأیید بیان آن بکار گرفته شد. با کمک الایزا میزان اتصال آنتی بادی I44 به TNF-α مطالعه و با استفاده از پایگاه های اطلاعاتی پروتئین، آنتی بادی I44 مدل بندی و مطالعات داکینگ مولکولی بین TNF-α و دمین آنتی بادی I44 انجام شد. یافته ها: در این پژوهش، آنتی بادی I44 در سیستم بیانی باکتری بطور موفقیت آمیزی بیان و تخلیص گردید. نتایج نشانگر یک باند در ناحیه 17 کیلودالتون روی ژل SDS-PAGE بود. آنالیز وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی ضد دنباله هیستیدینی، تولید آن را تأیید کرد. آنتی بادی I44 تخلیص شده، تمایل مناسبی نسبت به TNF-α نشان داد (Mµ 18/ 5Kd=). مطالعات داکینگ مولکولی نشانگر برهم کنش های هیدروفوبیک و هیدروژنی بین آنتی بادی I44 و TNF-α بود. نتیجه گیری: در پژوهش حاضر، دمین آنتی بادی I44 ضد TNF-α بیان و خالص سازی شد و با کمک تکنیک های مختلفی تخلیص آن تأیید گردید و تمایل مناسبی نسبت به TNF-α نشان داد. این یافته ها می تواند در طراحی و توسعه داروهای جدید علیه TNF-α مورد استفاده قرار گیرد.