شناسایی و جداسازی سویه های اشریشیاکلای با امکان تولید کولیسین ازنمونه های بالینی بدست آمده در بیمارستان امام رضا تبریز

Abstract

مقدمه به دلیل شیوع روز افزون پاتوژن های مقاوم به آنتی بیوتیک، درمان برخی بیماری های عفونی با دشواری روبرو شده است. لذا نیاز مبرمی به مواد آنتی میکروبیال جدید و استراتژی های نوین جهت غلبه بر مقوله مقاومت آنتی بیوتیکی وجود دارد. در این راستا نیازمند توسعه کلاس های آنتی بیوتیک ها با مکانیسم های مهاری جدید هستیم که بتوان آنها را جایگزین آنتی بیوتیک های فعلی کرد و یا همراه با آنتی بیوتیک های معمول برای سویه های مقاوم مورد استفاده قرار داد. پپتید های ضد میکروبی نظیر باکتریوسین ها، مواد درمانی نوید بخشی هستند که این ویژگی خود را مدیون کشندگی سریع و اختصاصی علیه پاتوژنها می باشند. هدف هدف از پروژه حاضر بررسی تولید کولیسین در سویه های بالینی E. coli بدست آمده در بیمارستان امام رضای تبریز و بررسی اثر مهاری آنها روی باکتری های اندیکاتور می باشد. روش کار در مطالعه حاضر 35 نمونه E. coli از آزمایشگاه بیمارستان امام رضا تبریز دریافت شد و تحت آزمایشات غربالگری برای یافتن سویه با اثر ضدمیکروبی به روش لکه گذاری در آگار علیه باکتری های شاخص قرار گرفت. تخلیص اولیه نمونه مثبت با روش ترسیب با آمونیوم سولفات انجام گردید. یافته ها نتایج حاصل از پژوهش حاضر نشان داد که 1 سویهE. coli. به طور بالقوه مهار کننده رشد سویه های شاخص می باشد و باکتریوسین تولید شده دارای مقاومت نسبی به دما و حساسیت به آنزیم پروتئیناز K میباشد. تخلیص اولیه با آمونیوم سولفات تغلیظ ماده ضدمیکروبی و افزایش اثر آن را نشان داد. نتیجه گیری این پروژه روی بررسی تولید باكتریوسین در سویه های E. coliبه روش بیو اسی بوده و توانسته است یک سویه با اثر ضد باکتریایی را جداسازی کند که میتواند جهت استفاده آتی مورد آزمایشات تکمیلی و تخلیص بیشتر قرار گیرد. , Introduction Antimicrobial peptides (AMPs) produced by a variety of microorganisms have gained lots of attention as novel antibacterial alternatives to combat antibiotic resistance problem. Bacteriocins have bactericidal action against closely related bacteria to producer strains. The bacteriocins have some properties which make them good candidates as new generation of antimicrobials (i) their high potency, (ii) the narrow inhibition spectrum, (iii) the high stability against many harsh conditions, (iv) being open to bioengineering. The mechanism of antibacterial action of bacteriocins differs deeply from classical antibiotics. In general, the bacteriocins can eradicate sensitive bacteria by two methods, in the first mechanism, they may target the cell envelope by producing pores or hindering cell wall biosynthesis which are observed among both Gram negative and Gram positive bacteriocins. In the second method, they may act intracellularly to inhibit essential enzymatic/metabolic processes such as DNA synthesis, transcription and translation which are found only among Gram negative bacteriocins. Objective The objective of this study was examination on colicin production in clinical isolates of E. Coli from Imam Reza hospital-Tabriz and checking their inhibitory effect against indicator bacteria. Methods In this study, 35 sample were collected from Imam Reza hospital’s laboratory and screened for strains with antimicrobial effects by agar-spot method against indicator bacterias. Initial purification was done using ammonium sulfate sedimentation method. Results The results of this study showed that a strain of bacteria potentially inhibits another indicator strains. Produced Colicin was heat-resistance and sensitive to proteinase K enzyme. Initial purification with ammonium sulfate led to concentrate and enhance the effectiveness of the antimicrobial agent. Conclusion The study examined colicin production in E. Coli strains by bio-assay method and it has been able to isolate a strain with antibacterial effect which was secreted to cuture media, mostly heat-stable and enzyme resistant. And can be used for compelementrity and purification tests in future. Key words bacteriocin,colicin,E. coli,bio-assay