تشخیص توالی DNAی هدف بر روی DNAی ژنومیک بدون نیاز به PCR و تکثیر DNAی هدف

Abstract

ماده ژنتيکي هر ارگانيسم شامل اطلاعات حياتي در مورد ويژگي ها و صفات گوناگون وي مي-باشد. تشخيص توالي بازهاي خاص در نوكلئيك اسيدهاي انساني، ويروسي و باكتريايي در تشخيص عوامل بيماريزاي ژنتيکي، در تحقيقات زيست محيطي و در علوم جنايي جهت تشخيص هويت افراد از اهميت بسزايي برخوردار مي‌باشد. علاوه بر آن، آناليز توالي ژني و مطالعه نظم ژني نقش اساسي درتوسعه سريع تشخيص‌هاي مولكولي و در اكتشاف داروها دارد. هدف: معرفی يک روش حساس و ارزان براي تشخيص مستقيم توالي DNA هدف درنمونه DNA ژنوميک دو رشته اي بدون تکثير توالي DNA هدف و بدون دناتوراسيون، به روش الکتروشيميايي. روش کار و مواد: این بیوسنسور بر پايه تثبيت پروب PNA تک رشته اي 23 نوکلئوتيدي وابسته به ژن ToxA ، بر روي الکترود طلا طراحي و تهيه شد. تشکيل هيبريد بين پروب PNA و DNA ژنوميک دورشته اي مکمل آن به عنوان توالي هدف، توسط روشهاي DPV و با بکارگيري شناساگر MB بر روي سطح الکترود طلاي اصلاح شده با پروب ارزيابي گرديد. تشخيص هيبريداسيون برپايه تغيير پيک جريان متيلن بلو بعد از تشکيل هيبريد بين پروب و DNA ژنوميک دو رشته اي مي باشد. امکان تشخيص توالي DNA هدف در DNA ژنومي استخراج شده بدون انجام PCR، ولي از طريق اعمال ورتکس به منظور تبديلDNA ژنومي به قطعات کوچکتر بررسي گرديد. عوامل متغير موثر بر کارايي سنسور نيز بررسي گرديدند. یافته ها و نتیجه گیری: با استفاده از بیوسنسور طراحی شده برای اولین بار تشخیص مستقیم DNAی ژنومیک بدون نیاز به تکثیر توالی هدف توسط PCR و بدون نیاز به دناتوراسیون DNAی دورشته ای به تک-رشته ای توسط روش الکتروشیمیایی امکان پذیر شد. آزمايشات تشخيصي با DNA ژنومي غير مکمل با پروب اختصاصيت اين روش را مورد تاييد قرار داد. حد تشخیص اين روش براي تشخيص نمونه هاي DNA ژنومي حدودا ng/µl 4/0 تخمين زده شد.