اثرات خاموش کردن ژنROCK(1,2) برروی آپوپتوز وتکثیردرسرطان سلول سنگفرشی دهان ; درشرایط آزمایشگاهی

Abstract

مـقدمه : ژن Rock دارای 2 ایزوفرم ( زیر گروه ) Rock1 و Rock2 می باشد که در تعیین مورفولوژی سلول، چسبندگی های بین سلولی و آپوپتوز دخیل است. مهار توالی های Rock توانایی تهاجم و مهاجرت سلول های سرطانی را کاهش می دهد. ( Squamous Cell Carcinoma ) SCC شایع ترین نئوپلاسم دهانی است که پتانسیل تهاجم بالایی دارد. در بین روش های نوین درمانی، خاموش کردن ژن که اثر بالا و عوارض جانبی کمی را داشته برای درمان سرطان معرفی شده است.Short or small interfering RNA ) SiRNA) در درمان های مربوط به خاموش کردن ژن بکار می رود. اهداف: هدف از این مطالعه بررسی اثرROCK1 SiRNAو اثرROCK2 SiRNA برروی آپوپتوز و پرولیفراسیون اسکواموس سل کارسینومای سروگردن می باشد.مواد و روش کار: در این مطالعه برای بررسی میزان اثر SiRNA مربوط به ROCK1 ، ROCK2 روی رده سلولی SCC (HN5) آزمایشات متعددی انجام شد. گروه های مطالعه شامل SiRNA ژن های ROCK1، ROCK2، ROCK1+ROCK2، ROCK1+cisplatin، ROCK2+cisplatin، ROCK1+ROCK2+cisplatin بود. گر.ه های کنترل شامل رده سلولی اپیتلیال نرمال (BEAS-2B) و رده سلولی سرطانی (HN5) بدون تیمار بود. SiRNA بعد از گذشت 24 ساعت از انتقال و جای گذاری سلول ها، به 6well ها و 96wellها اضافه شد و تست های آزمایشگاهی بعد از گذشت 48 ساعت روی سلول ها اعمال شد. تست MTS برای بررسی میزان پرولیفراسیون سلولی بعد از درمان، تست Real time PCR برای بررسی موفقیت SiRNA در میزان خاموش کردن ژنROCK، تست ELISA برای بررسی میزان کاهش پروتئین تولید شده در اثر مهار ژن ROCK و تست Flow cytometry برای بررسی میزان آپوپتوز القاء شده توسط درمان SiRNA ROCK1 وSiRNA ROCK2 استفاده شد. نهایتا از تست DAPI جهت سنجش تغییرات مورفولوژیک ایجاد شده در سلول ها استفاده شد. یافته ها : موفقیت آمیز بودن خاموشی ژن ROCK1 و ROCK2 با یافته های حاصل از Real time PCR تایید شد.پرولیفراسیون سلولی در تست MTS در تمامی گروه های درمانی دارای اختلاف معنا داری نسبت به گروه کنترل (درمان نشده ) بود (P<0.05). پایین ترین میزان پرولیفراسیون سلولی مربوط به گروه های درمانی siRNA Rock2+cisplatin و siRNA Rock1+Rock2+cisplatin بود. تفاوت معنی دار در تمامی گروه های درمانی نسبت به گروه کنترل (درمان نشده ) در تست ELISA (P<0.05) دیده شد. تولید پروتئین حاصل از این ژن ها هم در تست ELISA کاهش یافته بود اما در گروه درمان شده با siRNA Rock1، تفاوت معنی داری بین گروه کنترل و گروه درمان شده ی رده ی سلولی نرمال، وجود نداشت.در نتایج Flow cytometry بیشترین میزان آپوپتوز در تمامی گروه های تیماری رده ی سلولی سرطانی و کمترین میزان در رده ی سلولی نرمال مشاهده شد. نتایج تست DAPI هم با نتایج Flow cytometry منطبق بود.نتیجه گیری: با خاموش کردن ژن ROCK1 و ROCK2 توسط SiRNA (به ویژه ROCK2 ) می توان به طور موثری آپوپتوز و پرولیفراسیون سلولی را در SCC کاهش داد