تعیین اثر اولئوروپین بر بیان ژن های miR-21 و miR-155 در رده سلولی MCF-7 سرطان پستان

Abstract

مطالعه حاضر جهت تعیین اثر درمانی اولئوروپین روی سلول های MCF-7 سرطان پستان از طریق مداخله با دو miRNA اصلی miR-21 و miR-155 انجام شده است. این مطالعه اولین مطالعه ای است که به ارتباط بین اولئوروپین و miRNA ها در سرطان پستان می پردازد.به منظور ارزیابی زیست پذیری سلول های MCF-7 تحت تاثیر اولئوروپین، از تست MTT استفاده شد. سلول ها تحت تیمار غلظت های مختلف اولئوروپین طی 24و 48و 72 ساعت قرار گرفتند و غلظت IC50 محاسبه گردید. برای افتراق نوع مرگ سلولی القا شده توسط اولئوروپین، تست Annexin V-PI به کار گرفته شد و برای بررسی اثر ضد تهاجمی اولئوروپین روی سلول های سرطانی پستان، از تست Scratch استفاده شد. بطور اختصاصی جهت بررسی تغییر بیان miR-21 و miR-155 و ژن های هدف آن ها یعنی ژن های APAF-1 ، PTEN ، FADD و TP53INP1 تحت تاثیر اولئوروپین، از آزمایش Real-time PCR استفاده گردید.نتایج مطالعه حاضر نشان داد که اولئوروپین باعث کاهش زیست پذیری سلول های MCF-7 سرطان پستان بصورت وابسته به غلظت و وابسته به زمان می شود. نتایج تست Annexin V-PI ثابت کرد که اولئوروپین باعث القای مرگ آپوپتوتیک در سلول های MCF-7 می گردد. ارزیابی تست scratch ثابت کرد که اولئوروپین باعث کاهش تهاجم سلول های سرطانی MCF-7 می گردد. آنالیز نتایج حاصل از تست Real-time PCR نشان داد که اولئوروپین باعث کاهش بیان miR-21 و miR-155 می شود که بیان نابجای افزایش یافته ای در سرطان پستان داشته است. همچنین نتایج حاکی از آن است که اولئوروپین باعث افزایش بیان ژن های هدف آپوپتوتیک این miRNA ها می گردد., This study was undertaken to determine the therapeutic effects of oleuropein through modulation of master oncomiRs (miR-21 and miR-155) and their apoptotic target genes in BC cells. The present study provides the first link between miRNA and oleuropein as a mechanism in BC. For analyzing the viability of the oleuropein treated MCF-7 cells, MTT test was used. The cells were treated with several concentrations of oleuropein for 24, 48 and 72 hours to determine the IC50 of oleuropein. The Annexin V-PI test was applicated for differentiate the type of the cell death induced by oleuropein. For analyzing the anti-migrative effect of oleuropein on breast cancer cells, Scratch test was applicated. Specifically, the effect of oleuropein on miR-21 and miR-155 and their target genes (APAF-1, PTEN, FADD, TP53INP1) expression was assessed through qRT-PCR. It was found that oleuropein induced apoptosis and retarded cell migration and invasion in a dose-dependent manner in the human MCF-7 BC cell line. It was observed that oleuropein significantly decreased expression of both miR-21 and miR-155 over time in a dose-dependent manner that had ectopic expression in breast cancer. Also oleuropein increase the expression of their target genes which were decreased in breast cancer.