بررسی تاثیر سرکوب بیان ژن EZH2 با استفاده از siRNA اختصاصی و تاثیر آن بر بیان ژن های هدف آن در رده سلولی MOLT-4

Abstract

هدف از این مطالعه سرکوب بیان ژن EZH2 به وسیله ی RNA کوچک مداخله گر(siRNA) در رده ی سلولی MOLT-4 و بررسی اثرات آن در آپوپتوز سلولی و بیان ژن های NOTCH1، TCF-1، GATA3، NFATC1، IKZF1 در ردهی سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد T است. siRNAاختصاصی EZH2 به سلولهای لوسمی لنفوبلاستیک ردهی سلولی (MOLT-4) انتقال داده شد. سطح بیان EZH2، NOTCH1، TCF-1، GATA3، NFATC1، IKZF1 از طریق qRT-PCRاندازه گیری شدند. میزان افزایش حساسیت و کشندگی siRNA از طریق آزمایش MTT و اثر القا مرگ سلولی توسط آزمایش فلوسایتومتری اندازه گیری شد. با ترانسفکشن siRNA EZH2 در سلول‌هایMOLT-4 ، بیان ژن EZH2 به صورت وابسته به دوز کاهش یافت. کاهش بیانEZH2 تاثیری روی زیست پذیری و آپوپتوز سلولهای MOLT-4 نداشت. نشان داده شد که EZH2 بیان ژن های NOTCH1 ، TCF-1، GATA3، NFATC1، IKZF1 را تحت تاثیر قرار میدهد، به طوری که مهار ژن EZH2 میزان بیان NOTCH1، NFATC1 را به طور موثری کاهش و بیان IKZF1 وTCF-1 را افزایش داد. با مهار EZH2 میزان بیان GATA3 کاهش پیدا میکند ولی این کاهش از نظر آماری معنادار نبود., In the present study, we aimed to suppress EZH2 gene expression using a synthetic small interfering RNA (siRNA) in a cell line of T-ALL and further evaluated apoptotic cell death and the expression of NOTCH1, TCF-1, GATA3, NFATC1, IKZF1 genes in the cell line. EZH2-specific siRNA was transfected into the MOLT-4 cell line. The expression of NOTCH1, TCF-1, GATA3, NFATC1, IKZF1 and EZH2 was quantified by quantitative real time PCR. MTT assay was used to measure the influence of the siRNA. Apoptotic cells were assessed by flow cytometry. we observed increase expression of EZH2 in MOLT-4 cell lines correlated to normal T cells. siRNA transfection reduced EZH2 expression in a dose dependent manner. The rusults showed that decreased expression of EZH2 had no significant effects on cell viability and apoptosis. So that, EZH2 suppression induce a significant increase in IKZF1 and TCF-1 gene expression and decreased the expression of NOTCH1 and NFATC1 while the effects of EZH2 inhibition on GATA3 were not statistically significant.