بررسی اثر جایگزینی miR-143 در مهار رشد و متاستاز رده سلولی MKN-45 سرطان معده

Abstract

در این مطالعه، سعی داریم با بزگردانی بیان miR-143 در سلول¬های رده MKN-45 سرطان معده نقش این miRNA را در آپوپتوز، پرولیفراسیون و مهاجرت سلولی بررسی کنیم.ابتدا رده سلولی MKN-45 از سرطان معده را در محیط کشت RPMI-1640 کشت دادیم، سپس با وکتور پلاسمیدی PCMV-miR-143 ترانسفکت کردیم. تاثیر بازگردانی بیان miR-143 دررشد و بقاء سلولی را با روش¬MTTارزیابی کردیم، جهت بررسی میزان مهاجرت سلولیاز تستwound healing assayاستفاده کردیم و برای ارزیابی آپوپتوز سلول¬های ترانسفکت شده از روش رنگ¬آمیزی DAPIاستفاده کردیم، همچنین سطح تغییرات بیان ژن-های C-Myc, K-Ras, MMP-9, Caspase-3, Caspase-9, Bax که نقش کلیدی در بقاء تهاجم و آپوپتوز دارند مورد مطالعه و ارزیابی قرار دادیم.با توجه به نتایج بدست آمده، بازگردانی بیان miR-143 در سلول¬های MKN-45 باعث القاء آپوپتوز و همچنین باعث افزایش بیان ژن¬های Caspase-3, Caspase-9, Bax گردید. این جایگزینی اثر مهاری در پرولیفراسیون و تهاجم سلول¬های MKN-45 داشت و باعث کاهش بیان ژن¬هایC-Myc, K-Ras, MMP-9 شد., In the present study, we have tried to restore the miR-143 expression in MKN-45 cells and examine the role of miR-143 in gastric cancer apoptosis proliferation and migration. We transfected MKN-45 cells by pCMV-miR-143 plasmid vectors. Effects of exogenous expression of miR-143 on cell proliferation and migration were assessed by MTT and scratch test, respectively. Furthermore, DAPI staining assay was utilized for detection of apoptosis induction. After miR-143 grafting, alterations in K-RAS, C-Myc, MMP-9, Caspase-3, Caspase-9 and Bax mRNA levels, which play key roles in cell viability, invasion and apoptosis were evaluated. According to the outcomes, exogenous expression of miR-143 induced apoptosis in MKN-45 cells. Moreover, increased expressions of Caspase-3, Caspase-9 and Bax, as putative targets of miR-143, were observed. exogenous expression of miR-143 had negative effects on MKN-45 cells proliferation and invasion. Moreover, decreased expressions of K-RAS, MMP-9 and C-Myc, as putative targets of miR-143, were observed.