جدا سازی و بررسی عملکردقطعاتscFv آنتی بادی علیه گیرندهی c-Met از کتابخانهی آنتیبادی فاژی

Abstract

هدف از این مطالعه، جدا سازی و بررسی عملکردقطعاتscFv آنتی بادی علیه گیرندهی c-Met از کتابخانهی آنتیبادی فاژی می باشد. در این مطالعه، با استفاده از تکنیک پنینگ 1 scFv های اختصاصی علیه یک ناحیه 13 اسید آمینه ای از دُمِین خارج سلولی Met-c را از کتابخانه آنتیبادی فاژی 2 جداسازی کردیم. اختصاصیت scFv های جداسازی شده را با استفاده از روشهای مختلفی از جمله پلی کلونال الایزا، مونوکلونال الایزا، الایزای فاز محلول، کلونی پی سیآر ) colony PCR ( ، تکنیک printing Finger و سکانس کردن ژن 3 بررسی شده و در نهایت اثرات scFv های جداسازی شده را بر روی تکثیر، آپوپتوز، مهاجرت و تهاجم رده سلولی سرطانی کلورکتال مورد بررسی قرار دادیم. نتایج الایزا، اختصاصیت scFv های جداسازی شده نسبت به پپتید c-Met را تایید کرد و با آنالیز محصول پیسیآر ) PCR product ( و سکانس ژن مشخص شد که ژن جداسازی شده مربوط به مناطق متغییر زنجیرههای سبک و سنگین ) VH and V ( میباشد. در بررسی عملکرد scFv های جداسازی شده مشخص شد که این scFv ها میتوانند رشد، مهاجرت و تهاجم را در سلول های سرطانی کلون کاهش دهد و همچنین باعث القای آپوپتوز در این سلول ها شود. , c-Met is one of the goals of therapy in colorectal cancer which this signaling causes increased proliferation and survival of the tumor cells. c-Met binding to hepatocyte growth factor (HGF) initiates various signaling pathways. These pathways can induce angiogenesis, invasion and metastasis, and increase protection against apoptosis in cancerous cells. One method of inhibiting c-Met signaling is the use of monoclonal antibodies that are directed against this receptor. Small fragments of antibody variable region (scFv: Single-chain fragment variable) are introduced as ideal tools for targeting tumor cells because of the many advantages compared to full antibodies. In the present study, we employed a naïve phage library and isolated scFvs against a specific epitope from extracellular domain of c-Met (13amino acid) by panning process. The selected scFvs were further characterized using polyclonal and monoclonal phage ELISA, soluble monoclonal ELISA, colony PCR, fingerprinting and sequencing. Finally selected scFv effects on proliferation, apoptosis, migration and invasion of colorectal cancer cell lines were examined. The results of ELISA indicated specific reactions of the isolated scFvs against c-Met peptide and analyses of PCR product and sequencing confirmed the presence of full length VH and V inserts. The results also showed that scFv treatment significantly reduced growth, migration and invasion in colon cancer cells and induced apoptosis in these cells.