بررسی تغییرات بیان ژن HLA-Gدر بافت جفت در زنان با سقط مکرر و ارتباط آن با HLA-Gنول

Abstract

مطالعات بر روی فراوانی آلل نول HLA-G 0105N بر روی بیماران با سقط مکرر میتواند در فهم وجود ارتباط میان فراوانی این آلل و سقط مکرر در جمعیت‌ها کمک کننده باشد. ابتدا نمونه برداری از بافت جفت انجام شد. سپس RNAاستخراج گردیده بهcDNAمربوطه تبدیل گشت. بعد مناطق مورد نظر بر روی ژن HLA-G به روشReal Time PCR تکثیر یافت. برای استخراج DNA ژنومی از روش کلروفرم- نمک اشباع استفاده شد و سپسPCR وتعیین توالیانجام شد.علاوه براین، جهت تایید کاهش میزان بیانپروتئین HLA-G1در سطح سلولهای جفت نیز از روش ایمونوفلورسانس و ایمونوبلاتینگ استفاده شد.نتایج مطالعه حاضرکاهش بیان ژن HLA-G را در خانم های با سقط مکرر نشان داد. بعلاوه، هضم محصولات PCR با آنزیم اختصاصی میزان فرکانس آلل نول در جمعیت مورد مطالعه را در حدود 1 نشان داد. در نهایت نتایج بررسیها با استفاده از ایمونوبلاتینگ و ایمونوفلورسانس نشان داد که حضور آلل نول، باعث افت بیان در ژنHLA-G1در بافت جفت، در مقایسه با گروه کنترل می شود., Studies on the null allele of HLA-G frequency in recurrent miscarriage patients, could be useful in understanding of the relationship between the frequency of this allele and recurrent miscarriage in populations. First tissue sampeling from decidua was done. Then RNA extracted from tissues and converted to cDNA. The desired regions of the HLA-G gene was amplified by Real-time PCR method. Genomic DNA was extracted using salting-out technique. PCR was performed andsequencing process was done.Additionally, for the verification of enhancement or the reduction of HLA-G protein on the decidua cells, immunoblotting and immunofluorescence techniques were used. The results of the present study demonstrated decreased expression of HLA-G gene in women with recurrent miscarriage. Digestion ofthe restriction enzyme showed heterozygous HLA-G 0105N null allele in 10 % of the patients population.Finally, immunoblotting and immunofluorescence methods confirmed the reduction of HLA-G1 protein expression level in the patients placenta cells as compared with normal controls.