بررسی میزان بیانmiRNA29b و miRNA203درسلول‌های متاستاتیک سرطان مثانه پس از سرکوب بیانژن SNAIL 1

Abstract

طبق آمار سازمان جهانی بهداشت، سرطان مثانه (BC) چهارمین سرطان شایعدر مردان و دومین سرطان شایع دستگاه ادراری- تناسلی است. میزان بروز سرطان مثانه در مردان نسبت به زنان بیشتر است. در ایران،مردان چهار برابر بیش‌تر از زنان به سرطان مثانه مبتلا میشوند. حدود7درصد تمامی سرطان‌ها، مربوط به سرطان مثانه است ولی 30درصد علت مرگ و میر بیماران سرطانی مربوط به سرطان مثانه است. بنابراین سیر بیماری وخیم و دارای سرعت کشندگی زیادی است. حتی در بیمارانی که درمان آنها به خوبی صورت گرفته است، سرطان مثانه میتواند دوباره عود کند. عود سرطان میتواند در هر قسمت از سیستم ادراری مثل کلیه‌ها، پروستات، مثانه و مجاری ادراری دیده شود.استفاده از روش‌های متداول به منظور درمان این بیماری با محدودیت‌‌هایی از قبیل بروز عوارض جانبی جدی، وجود مقاومت دارویی، غیر اختصاصی بودن دارو و عود سرطان در نواحی دورتر همراه است. شناسایی تنظیم‌کننده‌های مولکولی کارآمد درگیر درفرآیندهای کارسینوژن، عامل بالقوه‌ای برای به کار رفتن به عنوان بیومارکر‌های تشخیصی اولیه واهداف درمانی برای تومورهای تهاجمی هستند. امروزه ثابت شده است که miRNA‌ها در پیشرفت سلول سرطانی و تهاجم ومهاجرت سلول نقش دارند. که یکی از این نقش‌ها تنظیم EMT (تبدیل فنوتایپ سلول از حالت اپی تلیال به حالت مزانشیم) میباشد. یکی از این ژن‌‌های القا‌کنندهی EMT، ژن SNAIL میباشد. فاکتور رونویسی SNAIL 1، یکzinc finger transcription factor میباشد که در دوران جنینی بیان میشود وبیان این ژن در افراد سرطانی در مراحل پیشرفته و متاستاتیک بیماری، افزایش پیدا میکند.هدف از این مطالعه سرکوب بیانژن SNAIL 1 بوسیله RNA کوچک مداخله گر siRNA)) و بررسی میزان بیانmiRNA21miRNA29b - miRNA203 -در رده سلولی سرطان مثانه انسان (Ej-138) است.مواد و روش‌ها:siRNA اختصاصی SNAIL 1 به سلول‌های Ej-138 انتقال داده شد. سطح بیان mRNAژن ‌های SNAIL 1، E-cadherinو miR203- miRNA29b- miRNA21از طریق qRT-PCRاندازه‌گیری شدند. میزان افزایش حساسیت و کشندگی siRNA از طریق آزمایش MTT، و وضعیت آپوپتوز سلولی توسط روش TUNELبررسی شدند.نتایج: در سلول‌های Ej-138به دنبال ترانسفکت SNAIL 1- siRNA بیان ژن SNAIL 1 وE-cadherinکاهش معنیداری را نشان دادند. کاهش بیان SNAIL 1باعث کاهش زیست‌پذیری و افزایش آپوپتوز در سلول‌های Ej-138 شد. همچنین در این مطالعه نشان داده شد که بعد از کاهش بیان ژن SNAIL 1 میزان بیانmiR29b و miRNA21 کاهش پیدا کرده است ولی بعلت بیان کم miR203تاثیری در بیان آن نداشت., The bladder cancere is Fourth most common cancer in men and the second most common cancer in the genital tract. In Iran, men are four times more likely than women to be diagnosed with bladder cancer. About 7 percent of all cancers are related to bladder cancer, but 30 percent of cancer patients, bladder cancer is the leading cause of death. In patients who have been treated them well, bladder cancer can reoccur. Cancer recurrence in any part of the urinary tract such as the kidney, prostate, bladder and urinary tract to be seen. Using conventional methods to treat the disease with serious limitations such as side effects, drug resistance, non-specificity of the drug and relapse is farther along. Efficient identification of molecular regulators involved in carcinogenic processes, potential avenue for early diagnostic biomarkers and therapeutic targets to go as aggressive tumors. It has been proved that miRNA in cancer progression and cell invasion and cell migration involved. One of these roles is regulating EMT. The aim of this study was to investigate the effect of a specific Snail-1 siRNA on apoptosis and alter EMT related miRNAs of Ej-138 (bladder cancer) cells.Experimental approach:The cells were transfected with siRNAs using transfection reagent. The cytotoxic effects of Snail-1 siRNA, on bladder cancer cells were determined using MTT assay. Relative Snail-1 mRNA levels were measured by QRT- PCR, respectively. Apoptosis was measured by TUNEL test based on labeling of DNA strand breaks. We also evaluated miRNA29b, miR-21 and miR-203 expression by QRT-PCR to determine alteration in miRNAs expression involved in EMT. Key results:Snail-1 siRNAsignificantly reduced mRNA expression levels in 48 hours after transfection at the concentration of 60 pmol in bladder cancer cells. We also showed that the silencing of Snail-1 led to the induction of apoptosis. miR-21 and miRNA29b depression have been shown in Snail-1 suppressed group in Ej-138 cells in vitro.