تاثیر مهار مسیرNFBبر مقاومت داروییAdriamycin در رده سلولی MCF-7سرطان سینه

Abstract

هدف از این مطالعه، بررسی تاثیر مهار مسیرNFBبر مقاومت داروییAdriamycin در رده سلولی MCF-7سرطان سینه می باشد.در مطالعه حاضر برای کاهش مقاومت به شیمی درمانی مسیر NFBP65توسط siRNAو مهار کننده شیمیایی JSH-23در سلول¬های MCF-7والد و مقاوم به داروی دوکسوروبیسین مهار شد. سپس میزان بیان ژن و عملکرد ABCها به ترتیب توسط Real time-PCRو فلوسیتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت.میزان بروز آپوپتوز نیز پس از تیمار در دو رده سلولی والد و مقاوم با روشReal time-PCRو فلوسیتومتریبررسی شد. چرخه سلولی و درصد سلولها در هر فاز از چرخه با روش فلوسیتومتری نیز مطالعه شد.نتایج حاکی از افزایش میزان بیان ژن¬هایNFBP65، آنتی آپوپتوتیک (Bcl-2)و کاهش بیان پرو آپوپتوتیک (Bax)در سلول¬ های مقاوم به دوکسوروبیسین در مقایسه با سلول¬های والد MCF-7است. در اینجا ارتباط بین NFBP65بعنوان فاکتور رونویسی و ABC ها در رده سلولی مقاوم کاملا مشخص شد. یافته ها نشان داد که NFBP65با افزایش بیان حدود 12 برابر در سلول¬های مقاوم به دوکسوروبیسین در مقایسه با سلول¬های حساس می¬تواند هدف مناسبی در درمان مقاومت به شیمی درمانی باشد.و مهار NFBP65توسط siRNAجهت خاموش کردن بیان ژن و یا توسط مهار کننده شیمیاییJSH-23باعث کاهش بیان ژن و عملکرد MDR1(ABCB1)و MRP1(ABCC1)شد. علاوه بر این مهارNFBP65باعث افزایش درصد سلول¬های آپوپتوتیکدرMCF-7مقاوم شد. و همچنین توانست مقدارBcl-2افزایش یافته در سلول¬های مقاوم را نیز کاهش دهد., Shedding light on chemoresistance biology of breast cancer could contribute to enhance clinical outcome. Intrinsic or acquired resistance to chemotherapy is a major problem in breast cancer treatment. Expression of ABC transporters as drug efflux pumps is one of the possible mechanisms to resist against chemotherapy in the cancer cells. As a result of drug efflux pumps function in cancerous cells, the accumulation of chemotherapy agent decrease inside the cells, wich leads to tumor relapse and chemoresistance.NFB pathway by siRNAP65 and JSH-23 as a translocational inhibitor of NFBP65 in the doxorubicin-resistant MCF-7 (MCF-7/Dox) and MCF-7 cells was blocked. Then, the ABC transporters expression and function were assessed by real time qRT-PCR and flowcytometry respectively. Induction of apoptosis was evaluated after inhibition of NFB pathway as well. Finally, the cell cycle phases were evaluated by cell cycle assay after inhibition of NFBP65.Our study underlined the fact that up-regulation of NFBP65, anti-apoptotic Bcl-2 and downregulation of pro-apoptotic Bax in the MCF-7/Dox cells compared with control MCF-7 cells. Here, we showed that interplay between nuclear factor kappa B P65 (NFkBP65) as a transcriptional regulator and ABC transporters in the MCF-7/Dox cancer cells. We found that inhibition of elevated expression of NFBP65 in the resistance breast cancer, whether translocational inhibition or silencing by siRNA, decreased the expression and function of MDR1(ABCB1) and MRP1(ABCC1) efflux pumps. Furthermore, blockade of NFBP65 promoted apoptosis via modulating of Bcl-2 and BAX expression. After inhibition of NFBP65 signaling pathway, elevated baseline expression of survival Bcl-2 gene (12 fold) in the resistant breast cells significantly decreased.