بررسی ارتباط بین موتاسیون‌های کانکسین 37 و افزایش خطر ابتلا به لنفوادمای ثانویه به درمان سرطان پستان با استفاده از روش HRM

Abstract

هدف از این مطالعه، بررسی ارتباط بین موتاسیون‌های کانکسین 37 و افزایش خطر ابتلا به لنفوادمای ثانویه به درمان سرطان پستان با استفاده از روش HRM می باشد.بدین منظورپس از نمونه گیری مناسب (جمع آوری خون تازه از بیماران و افراد کنترل از بین 2000 بیمار مبتلا به سرطان پستان)که ابتدا خونگیری و بدنبال آن سپس استخراج102 DNA ا ز گروههای مورد نظر (51 خانم بیمار مبتلا به لنف ادم ثانویه به سرطان پستان) و شاهد (51 خانم مبتلا به سرطان پستان بدون لنف ادم) برای بررسی پلی مورفیسم های ژن برای بررسی پلی مورفیسم های ژن GjA4 صورت گرفت ، سپس با استفاده از روش مولکولی Real Time PCR HRM برای تعیین وضعیت چند شکلی ها(Polymorphisms)استفاده شد. بدین منظورپس از نمونه گیری مناسب (جمع آوری خون تازه از بیماران و افراد کنترل از بین 2000 بیمار مبتلا به سرطان پستان)که ابتدا خونگیری و بدنبال آن سپس استخراج102 DNA ا ز گروههای مورد نظر (51 خانم بیمار مبتلا به لنف ادم ثانویه به سرطان پستان) و شاهد (51 خانم مبتلا به سرطان پستان بدون لنف ادم) برای بررسی پلی مورفیسم های ژن برای بررسی پلی مورفیسم های ژن GjA4 صورت گرفت ، سپس با استفاده از روش مولکولی Real Time PCR HRM برای تعیین وضعیت چند شکلی ها(Polymorphisms)استفاده شد. همچنین 10% از نمونه های مورد و شاهد را جهت تعیین سکانس شدند (Sequencing) ارسال نمودیم که در نهایت نتایج حاصله از این آزمون و مطالعه را تائید می کردند. از طریق روشهای آماری توصیفی (فراوانی-درصد) وآزمون رابطه مجذورکای، Ttest Ttest ومحاسبه نسبت شانس با 95 درصد فاصله اطمینان (p<0.05) و با استفاده از نرم افزار آماری SPSS.v20مورد بررسی و تجزیه تحلیل آماری قرارگرفت. در نهایت نتایج حاصله نشان میدهد که همراهی و ارتباط قوی بین چند شکلیrs3543 با فراوانی ژنوتیپی 4%/29 و705193 rsبا فراوانی ژنوتیپی 3%/84 مرتبط با لنفادم ثانویه به سرطان پستان در جمعیت مورد مطالعه ما وجود دارد. با استفاده از آزمون رگرسیون لوجستیک تایید شد که ژنوتیپ TT در rs3543 و نیز ژنوتیپ CG در rs705193 خطر ابتلا به لنف ادم ثاویه به سرطان پستان را به طور چشمگیری افزایش می دهد., The aim of this study is due to find the relationship between connexin 37 mutations and increased risk of secondry lymphedema following breast cancer treatment by HRM method.Materials and Methods:To conduct this research after obtaining written consent forms, fresh blood samples were taken from patients with breast cancer. Over 2000 patients with breast cancer were screened, and 102 patients were selected and classified in two groups – 51 breast cancer patients with secondary lymphedema and 51 breast cancer patients without secondary lymphedema. To investigate the SNPs in GJA4, we used Real Time PCR HRM analysis. Also to authenticate the HRM results, 10% of the samples were sequenced and analysed directly. The data were analysed using different statistical methods (Frequencies, Logistic Regression, t-test and Chi-Square Tests). Results:Results show that the distribution of rs3543 wit 29/4% genotype frequency and rs705193 with 84/3% genotype frequency was significantly different between cases and controls. Logistic regression analysis also confirmed that TT genotype of rs3543 was significantly associated with an increased risk of developing secondary lymphedema. In addition, rs705193 CG genotype was also significantly associated with secondary lymphedema.