ارزیابی برون تنی اثر آپوپتوتیک آلبندازول سولفوکساید و آلبندازول سولفوکساید لود شده با نانو ذرات پلیمری PLGA-PEG بر روی پروتواسکولکس های کیست هیداتید و بررسی شدت کشندگی آنها

Abstract

درمان ناقص کیست هیداتید در انسان با داروی آلبندازول به دلیل حلالیت کم در آب و نفوذپذیری کم آن باعث می شود سطح دارو در پلاسما و کیست کمتر از حد مورد نیاز برای درمان باشد. اخیرا تاثیرات کشندگی آلبندازول لود شده در نانو ذرات لیپیدی علیه پروتواسکولکس های کیست هیداتید به صورت وسیعی مورد آزمایش قرار گرفته است، در حالی که به علت درصد لود شوندگی کم، ناپایداری آن در جریان خون و حلالیت پایین آن ها با چالش هایی رو به رو می باشد. این مطالعه به منظور مقایسه تاثیر آپوپتوتیک آلبندازول سولفوکساید و آلبندازول سولفوکساید لود شده در نانو ذرات پلیمری PLGA-PEG (پلی لاکتید گلایکولید اسید کو پلی اتیلن گلایکول) علیه پروتواسکولکس ها در محیط برون تنی طراحی شده است.مواد و روش کار: آلبندازول سولفوکساید لود شده در نانو ذرات پلیمری PLGA-PEG با روش امولسیون تک گانه (W/O) تهیه گردید. غلظت های مختلف (50، 100، 150 و 200 میکروگرم بر میلی لیتر) از داروهای تهیه شده در زمان های (5، 10، 20، 30 و 60 دقیقه) علیه پروتواسکولکس های کیست هیداتید مورد مطالعه قرار گرفت.نتایج: آلبندازول سولفوکساید لود شده در نانو ذرات، در غلظت های 150 و 200 میکروگرم بر میلی لیتر در زمان های مذکور 100 درصد کشندگی نشان داد، در حالی که غلظت 200 میکروگرم بر میلی لیتر از آلبندازول سولفوکساید پس از 20، 30 و 60 دقیقه مجاورت به ترتیب 94، 100 و 100 درصد کشندگی نشان داد. میزان بیان ژن کاسپاز 3 در سطح mRNA با روش نیمه کمی RT-PCR بعد از 15 ساعت مجاورت اندازه گیری شد. میزان بیان ژن کاسپاز 3 در سطح mRNA در دو گروه آلبندازول سولفوکساید و آلبندازول سولفوکساید لود شده در نانو ذرات، بیشتر از دو گروه کنترل نشان داده شد، اگرچه این تفاوت از نظر آماری در دو گروه دارویی معنا دار نبود (P>0.05). نتایج روش های قطعه قطعه شدنDNA و تغییرات فراساختاری نشان داد که پروتواسکولکس های درگیر شده با آلبندازول سولفوکساید و آلبندازول سولفوکساید لود شده در نانو ذرات دچار آپوپتوز شده اند., Treatment failures attributed to human cystic echinococcosis (CE) with Albendazole (ABZ) have been associated with its low solubility, poor drug absorption rate resulting in low drug level in plasma and hydatid cysts. Recently protoscolicidal effects of ABZ loaded liposome nanoparticles have broadly evaluated; however these particles have several challenges due to their low encapsulated load and poor solubility. This study was designed to evaluate and compare in vitro apoptotic activities of ABZ sulfoxide (ABZs) and ABZs loaded PLGA-PEG against protoscoleces (PSC).Methods:ABZs loaded PLGA-PEG was prepared by single emulsion method (W/O). Various concentrations (50, 100, 150 and 200 g/ml) of ABZs and ABZs loaded PLGA-PEG at different exposure times (5, 10, 20, 30 and 60 min) were experimentally tested against protoscoleces of CE.Results: ABZs loaded PLGA-PEG at concentrations 150 and 200 g/ml showed 100% scolicidal rate in all times while concentration 200 g/ml of ABZs after 20, 30 and 60 min of exposure times showed 94%, 100% and 100% mortality rates respectively. The expression of Caspase-3 mRNA was assessed by semi-quantitative RT-PCR after 15 h of exposure. Caspase-3 mRNA expression was higher in both PSCtreated ABZs and PSC-treated-ABZs loaded PLGA-PEG than control groups (P<0.05) however, no significant difference was observed between apoptotic intensity of PSCtreated ABZs and PSC-treated-ABZs loaded PLGA-PEG (P>0.05). DNA fragmentation assay and ultrastructural changes revealed that ABZs and ABZs loaded PLGA-PEG were associated with apoptosis of PSC.