بررسی اثر کیس¬پپتین مشتق از تروفوبلاست جفت بر روی تکثیر، تهاجم و چسبندگی سلول¬های سرطانی پستان

Abstract

مقدمه و هدف: کیس¬پپتین ها یکی از عوامل مهم تنظیمی در تهاجم سلولهای سرطانی و سلولهای تروفوبلاست میباشند. تا کنون، گزارشات متناقض و محدودی در رابطه با تعدیل متاستاز سلولهای سرطانی پستان به واسطه ی کیس¬پپتین موجود میباشد. بیشترین مطالعات در این زمینه بر روی کیس¬پپتین 10سنتتیک صورت گرفته است.مواد و روش ها: 11 نمونه جفت از زنان کاندید سزارین دریافت گردید. بیان کیس¬پپتین در جفت و سلولهای تخلیص شده سیتوترفوبلاست به روش ایمنوفلورسانس و وسترن بلات بررسی شد. به منظور بررسی ترشح کیس¬پپتین ، ویلوسهای جفت بر روی ماتریژل کاشته و حضور کیس¬پپتین در مایع رویی کشت به روش وسترن بلات و ایمونوپرسیپیتاسیون بررسی شد . اثرات عملکردی کیس پپتین مشتق از جفت بر تکثیر، چسبندگی، تهاجم، حرکت ، تولید ماتریکس متالوپروتئینازها و تولید سایتوکاینهای پیش التهابی در MDA-MB-231 و MCF-7 ارزیابی گردید.یافته ها: سنسیشوتروفوبلاستهای جفت، در سطح بالایی کیس¬پپتین را ترشح میکردند. سوپ سلولی دارای کیس¬پپتین ، در مقایسه با سوپ سلولی فاقد کیس¬پپتین ، در حالت وابسته به دوز و زمان سبب کاهش قابل ملاحظه ای در تکثیر هر دو رده سلولی و کاهش چسبندگی MDA-MB-231 به ماتریکس خارج سلولی و افزایش فعالیت ماتریکس متالوپروتئیناز2و 9و افزایش تهاجم در این رده سلولی شد. افزایش تهاجم MDA-MB-231 مجاور با سوپ سلولی دارای کیس¬پپتین ، در مجاورت با p234مهار میگردد. مجاورت MDA-MB-231 و MCF-7 با سوپ سلولی دارای کیس¬پپتین به ترتیب سبب افزایش و کاهش حرکت گردید .مجاورت MDA-MB-231 و MCF-7 با p234به ترتیب سبب کاهش و افزایش حرکت گردید. تیمار MCF-7 با آنتاگونیستهای گیرنده استروژن، سبب کاهش حرکت سلولها شد. میزان اینترلوکین 6 در مایع رویی حاصل از کشت MCF-7 تیمار شده با سوپ سلولی حاوی کیس¬پپتین در مقایسه با کنترل بالاتر بود. در هر دو رده سلولی، میزان تولید اینترلوکین 8 در مایع رویی حاصل از کشت سلو لهای تیمار شده با سوپ سلولی حاوی کیس¬پپتین در مقایسه با کنترل افزایش یافت. , Kisspeptins are major regulators of trophoblast and cancer invasion. Thus far, limited and conflicting data are available on KP-mediated modulation of breast cancer metastasis; mostly based on synthetic KP-10. Methods: From eleven healthy women with uncomplicated term pregnancies undergoing elective cesarean, placentas were obtained. Expression of KPs in placental tissues and isolated cytotrophoblast cells was performed by Immunofluorescent staining and WB. In order to assess whether or not KPs are released in soluble form, villous tissues were explanted in plates coated with matrigel and the prescence of KPs in placental explant culture supernatants was investigated by WB and immunoprecipitation. functional effects of term placental KPs on proliferation, adhesion, Matrigel invasion, motility, MMP activity and pro-inflammatory cytokine production in MDA-MB-231and MCF-7 were surveyed.Results: we report for the first time comprehensive functional effects of term placental KPs on proliferation, adhesion, Matrigel invasion, motility, MMP activity and pro-inflammatory cytokine production in MDA-MB-231 and MCF-7. KPs were expressed at high level by term placental syncytiotrophoblasts and released in soluble form. Placental explant conditioned medium containing KPs significantly reduced proliferation of both cell types compared to CM without KP in a dose- and time-dependent manner. In MDA-MB-231, placental KPs significantly reduced adhesive properties, while increased MMP9 and MMP2 activity and stimulated invasion. Increased invasiveness of MDA-MB-231 after CM treatment was inhibited by P-234. CM significantly reduced motility of MCF-7, while it stimulated motility of MDA-MB-231. These effects were reversed by P-234. Co-treatment with selective ER modulators , inhibited the effect of CM on motility of MCF-7. The level of IL-6 in supernatant of MCF-7 treated with CM was higher compared to those treated with CM-w/o KP. Both cell types produced more IL-8 after treatment with CM compared to those treated with CM-w/o KP.