شناسایی اشرشیا کلی مولد شیگاتوکسین به روش Multiplex PCR و بررسی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی در سویه های جدا شده

Abstract

اشریشیا کلی تولید کننده شیگاتوکسین (STEC) یک پاتوژن مهم در بیماری¬های ناشی از مسمومیت¬های غذایی می باشد. آلودگی با این ارگانیسم می¬تواند باعث ایجاد بیماری¬هایی مثل اسهال آبکی و خونی، کولیت هموراژیک(HC) و سندروم اورمی همولیتیک(HUS) شود. باتوجه به فقدان هرگونه اطلاعات درمورد میزان شیوع و الگوی مقاومت آنتی¬بیوتیکی سروتیپ O157:H7 در تبریز، مشخص نمودن این اطلاعات از اهداف این پژوهش می¬باشد.مواد و روش¬ها: دویست سویه E.coli از نمونه¬های مدفوع اسهالی و غیراسهالی بیماران بستری و سرپایی بیمارستان امام رضا تبریز در سال 1393 جمع¬آوری شد. این سویه¬ها با کشت برروی محیط کشت MacConkey agar و با استفاده از روش¬های شیمیایی شناسایی و سپس روی محیط کشت Sorbitol MacConkey agar کشت داده شد. کلنی¬های سوربیتول منفی با استفاده از آنتی سرم O157 به عنوان سروتیپ O157 شناسایی شد. ژن-های stx-1، stx-2، eae و mdh با استفاده از روش Multilplex PCR شناسایی و مقاومت آنتی¬بیوتیکی سویه¬ها با استفاده از روش Kirby-bauer و معیارهای CLSI مشخص شد., Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is a food-borne pathogen and infection with this organism causes illnesses such as bloody diarrhea, hemorrhagic colitis and hemol`ytic-uremic syndrome. Considering the lack of any information about the prevalence rate and the antibiotic resistance pattern of O157:H7 serotype in Tabriz, finding answers to the above mentioned subjects are among the goals of this study.Materials and Methods: Two hundred E. coli strains from diarrheal or non- diarrheal stools of outpatients and hospitalized cases in Tabriz Imam Reza hospital were isolated between September and December 2014 using MacConkey agar and standard biochemical tests and then cultured in sorbitol MacConkey agar. The sorbitol negative isolates were confirmed as O157 serotype using O157 antisera. A Multiplex polymerase chain reaction (PCR) method was used for the detection of stx-1, stx-2, eae and mdh genes and the antibiotic resistance pattern of these isolates was determined using Kirby-bauer method and CLSI standards.Results: Of the isolates, 11 (5.5%) were sorbitol-negative which were later analyzed by Multiplex PCR method and the results revealed that 2 (18.18%) isolates contained the stx-1 gene, 10 (90.91%) isolates contained the stx-2 gene and 5 (45.45%) isolates contained the eae gene. The stx-2 and eae genes were the most commonly encountered virulence factors. All or most of the isolates were susceptible to ceftazidime (100%), gentamicin (100%), ciprofloxacin (100%), nalidixic Acid (90.9%), trimetoprim sulfametoxazol (90.9%), chloramphenicol (90.9%), ampicillin (81.8%) and cephalothin (72.7%). On the contrary, moderate susceptibility of isolates to doxycycline (54.5%) was observed.