بررسی نقش گرلین بر بیان ژن های1,2 CatSper، تغییرات فراساختاری بافت بیضه و پارامترهای اسپرم ناشی از سیکلوفسفامید در موش های بالغ

Abstract

سیکلوفسفامید دارویی هست که برای شیمی درمانی و سرکوب سیستم ایمنی در پیوند ارگان ها استفاده می شود. این دارو علیرغم كاربردهای كلینیكی فراوان در درمان سرطان، دارای اثرات سمی بر بافت هـای بدن به ویژه ارگان های جنسی می باشد. یكی از مهمترین عوارض جانبی آن، تغییر عملكرد سیستم تناسلی در جنس نر است كه ممكن است منجر به ناباروری گردد. هدف این مطالعه بررسی اثر آنتی اکسیدانی گرلین در برابر آسیب های بیضه ای ناشی از القای استرس اکسیداتیو توسط سیکلوفسفامید می باشد. مواد وروش ها: در این تحقیق تجربی 40 سر موش سوری 2 ماهه به طور تصادفی به 4 گروه 1) کنترل 2) سیکلوفسفامید 3) سیکلوفسفامید + گرلین 4) گرلین تقسیم شدند. سیکلوفسفامید هفته ای یک بار mg/kg) 100) و گرلین (µg/kg80) روزانه به مدت 5 هفته به صورت داخل صفاقی تزریق شدند. پس از 5 هفته موش ها کشته شده و بیضه ها و اپیدیدیم ها خارج شد. از بیضه چپ جهت بررسی تغییرات فراساختاری و از بیضه راست جهت بررسی فاکتورهای استرس اکسیداتیو و نیز بیان ژن های Catsper1,2 استفاده شد. همچنین از اپی دیدم ها برای بررسی پارامترهای اسپرمی، فاکتورهای استرس اکسیداتیو، قدرت باروری به روش IVF و ایمونوسیتوشیمی استفاده گردید.نتایج: بررسی های فراساختاری نشان داد که سیکلوفسفامید موجب اثرات تخریبی در بافت بیضه می شود. همچنین نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که سیکلوفسفامید به طور معناداری باعث کاهش بیان ژن های Catsper1,2 و شدت سینگال پروتئین Catsper1,2 در قطعه میانی اسپرم نسبت به گروه کنترل شد (05.p<0). علاوه بر این بررسی ها نشان داد که سیکلوفسفامید باعث افزایش معنادار سطحMDA و کاهش معنادار SOD، GPx و TAC بافت بیضه می شود (05.p<0). قرارگیری موش ها در معرض سیكلوفسفامید باعث کاهش معنادار تعداد و قابلیت حیات اسپرم ها، ظرفیت آنتی اکسیدانی تام و افزایش تعداد اسپرم های بدشكل گردید. از طرف دیگر، سطح MDA اسپرم ها به طور معناداری افزایش یافت (05.p<0). همچنین درصد باروری اسپرم ها نیز در گروه سیکلوفسفامید کاهش نشان داد (05.p<0). درمان با گرلین به طور معناداری باعث بهبودی پارامترهای فوق گردید (05.p<0)., Cyclophosphamide is a drug used for chemotherapy and as an immune-suppressive in the organ transplantation. Despite its many clinical implications in the treatment of cancers, this drug has toxic effects on the reproductive system. Functional change in the male reproductive system is one of the most important side effects that may lead to infertility. The aim of this study is to evaluate the antioxidant effect of ghrelin against damages caused by oxidative stress induced by cyclophosphamide in the mice testes. Material and Methods: In this experimental study, 40 male mice were randomly divided into 4 groups: 1) control, 2) cyclophosphamide 3) cyclophosphamide + ghrelin 4) ghrelin. Cyclophosphamide (100 mg/kg) was injected intraperitoneally once a week and ghrelin (80 g/kg) was administered intraperitoneally daily for 5 weeks. After 5 weeks, mice were killed and their testicles and epididymides were removed. Left testes use to study of ultrastructural changes and the right testes use to study of oxidative stress markers, as well as the expression of CatSper1 and CatSper2 genes. Also epididymides were removed to check out sperm parameters, oxidative stress markers, fertility rate and immunocytochemistry. Results: ultrastructural studies show that Cyclophosphamide causes degenerative change in the testes. Also, the results of this study showed that administration of Cyclophosphamide decreases the expression of CatSper1 and CatSper2 genes and signal intensity of CatSper1 and CatSper2 protein at the middle piece of sperm compared to the control group (p<0.05). Moreover, our results showed that cyclophosphamide increased the level of MDA and decreased SOD, GPx and the TAC, significantly (p>0.05). Also, in the mice exposed to cyclophosphamide, the number of sperm and viability, as well as total antioxidant capacity decreased significantly (p<0.05). The increase in the abnormal sperm and MDA levels was observed (p<0.05). In addition, the fertility rate decreased in cyclophosphamide group (p<0.05). However, the administration of ghrelin in the treatment group significantly prevented the damaging effects of cyclophosphamide (p<0.05).