برررسی اثر جایگزینی 143-miR در مهار رشد و متاستاز رده سلولی 480SW سلولهای سرطانی كولوركتال

Abstract

سرطان کولورکتال سومین سرطان شایع در مردان و دومین در زنان و چهارمین عامل مرگ و میر در سراسر جهان است. این سرطان شیوعی بیش از 9% دارد. MicroRNA ها اخیرا به عنوان تنظیم کننده های کلیدی در سرطان کولورکتال شناسایی شده اند. MicroRNA replacement therapy یکی از استراتژی¬های اخیر برای بازگرداندن سطح بیان microRNA های تومور ساپرسورکاهش یافته به میزان اولیه است. در این مطالعه ما ثابت کردیم که سطح بیان miR-143 در سل لاین¬ها و بافت¬های سرطانی کولورکتال کاهش یافته است. بنابراین ما از تکنیک MicroRNA replacement therapy برای بیان miR-143 در سل لاین SW-480 توسط وکتور ژنی استفاده کردیم. مواد و روش¬ها: در مطالعه¬ی حاضر، کاهش بیان miR-143 در سل لاین سرطانی SW-480 کولورکتال تایید شد. متعاقبا جایگزینی miR-143 در سل لاین مذکور با استفاده از ترانسفکشن با وکتور PCMV-miR143 تایید شد. بعد از اثبات افزایش بیان miR-143 از طریق qRT-PCR، تغییر بیان mRNA ژن¬های KRAS، MMP-9 و c-Myc با این تکنیک تایید شد. همچنین wound healind assay یا تست scratch اثر مهاری miR-143 روی مهاجرت سل لاین SW-480 را نشان داد. اثر جایگزینی miR-143 روی بقای سلول¬ها با تکنیک MTT تایید شد. سپس رنگ آمیزی DAPI جهت تایید فرایند آپوپتوز در سلول¬های ترانسفکت شده انجام شد.نتایج: تکنیک MTT کاهش بقای سلولی در سلول¬های تراسفکت شده با miR-143 را نشان داد. رنگ آمیزی DAPI نیز تایید کننده¬ی کاهش بقای سلول¬ها از طریق فرایند آپوپتوز در این رده¬ی سلولی بود. تکنیک qRT-PCR نیز نشان دهنده¬ی کاهش بیان mRNA ژن¬های KRAS MMP-9 و c-Myc در سلول¬های ترانسفکت شده در مقایسه با سلول¬های کنترل بود. , Colorectal cancer is the third most common cancer in men and second in women and fourth most common cause of death worldwide. It also accounts for over 9% of all cancer incidence. MicroRNAs have recently appeared as key regulators of CRC. MicroRNA replacement therapy is one of the most recent strategies used for restoring the lack of tumor supressor miRNAs. Here we establish that miR-143 was down-regulated in colorectal cancer tissues and cell lines. Thus we used microRNA replacement therapy by expressing this microRNA in the SW-480 cell lines using a gene vector.Materials and Methods: In the present study, downregulate of miR-143 was assessed and confirmed in SW-480 CRC cell line. Subsequently miR-143 replacement was performed by transfecting the mentioned cell with PCMV-miR-143 vector. After confirmation of miR-143 upregulations by qRT-PCR, expression changes of KRAS, c-Myc and MMP-9 mRNAs were investigated by this technique. Morever, wound healing assay revealed the inhibitory effect of miR-143 on migration. Effects of miR-143 restored expression on cell viability also assesed by MTT assay. Then, DAPI staining was utilized to detect apoptosis accurrence in the transfect cells. Results: MTT assay revealed a decreased viability in the miR-143 transfected cells. DAPI staining confiremed the occurrence of apoptosis in these cells. qRT-PCR indicated decreased expression of KRAS, MMP-9 and c-Myc mRNAs in the transfected cells compared to controls.