میزان بیان c-Rel و تاثیر مهار کننده آن بر تکامل سلول های ایمنی B و T وNK از سلول های بنیادی خون بند ناف

Abstract

هدف از انجام این مطالعه تأثیر اینترلوکین های 2، 7، 15 و سایتوکاین های SCF و FLT3 بر روی بیان ژن c-Rel در سلول‌های تک‌هسته‌ای و بنیادی خون‌بند ناف در طی تکامل سلول‌های لنفوئیدی است. علاوه بر آن تأثیر مهار c-Rel بر روی گسترش، تکثیر و آپوپوتوز سلول‌های B, T و NK مشتق از خون‌بند ناف مورد ارزیابی قرار گرفت.سلول‌های مونونوکلئار با استفاده از فایکول از خون‌بند ناف جداسازی شدند. سپس سلول‌ها در حضور سایتوکاین های SCF, FLT3, IL2, 7, 15 به مدت 21 روز کشت داده شدند. بیان ژن c-Rel در روزهای صفر، هفت، چهارده و بیست‌ویک با استفاده از Real Time PCR ارزیابی شد. مهار ژن c-Rel با استفاده از siRNA انجام گرفت سپس میزان سلول‌های لنفوسیتی B, T و NK بعد از مهار ژن c-Rel در سلول‌های مونوکلئار و CD34+ در روز چهاردهم کشت با استفاده از فلوسایتومتری ارزیابی شد. نتایج نشان داد میزان بیان ژن c-Rel در حضور سایتوکاین های SCF, FLT3 در روز چهاردهم در بیشترین مقدار خود است اما با اضافه کردن اینترلوکین های 2، 7 و 15 این مقدار کاهش مییابد. مهار c-Rel توسط siRNA باعث کاهش تعداد سلول‌های B,T و NK و میزان تمایز این سلول‌ها میشود. مهار c-Rel باعث کاهش تکثیر سلولی میشود اما روی آپوپتوز تاثیر ندارد., The aim of this study was to evaluate the effect of Interleukin-2, 7, 15 and SCF, FLT3 cytokine on c-Rel gene expression in mononuclear and umbilical cord blood stem cells (CD34+ cells) during development to lymphoid cells. In addition to, were evaluated impact of c-Rel inhibition on expansion, proliferation and apoptosis of cord blood-derived B, T, and NK cellsMaterial and Methods: The mononuclear cells were isolated from umbilical cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Then cells were cultured for 21 days in the presence of SCF, FLT3, IL2, 7, 15 cytokines. C-Rel gene expressions were evaluated in freshly isolated cells, 7, 14 and 21 days of culture by Real-Time PCR. siRNA used for inhibition of c-Rel. Then amount of B, T and NK cell after c-Rel inhibition evaluated by flow cytometry in MNCs and CD34+ cells in day 14 of the experiment.Results:The results showed c-Rel expression increased in the presence of SCF and Flt3 but was reduced in additional IL-2, IL, 7 and IL-15 were used all together. Inhibition of c-Rel by siRNA reduced cord blood-derived B, T, and NK cell differentiation and expansion. Inhibition of c-Rel reduced proliferation but didn’t influence in apoptosis.