ساختار بافتی غضروف مهندسی شده از کندروسیت انسانی در داربست طراحی شده از پرده سینوویال

Abstract

مهندسی بافت روش جدیدی جهت ترمیم ضایعات غضروفی است. پیوند کندرسیت خود فرد (ACT) یکی از روش های مهندسی بافت است که بر پایه گسترش کندروسیت ها در کشت تک لایه ای است که دارای محدودیت هایی است. کشت کندروسیت ها در داربست، مورفولوژی کندروسیت ها را حفظ می کند. کاربرد داربست های مشتق از ماتریکس خارج سلولی بافت های طبیعی نسبت به داربست های مصنوعی در بالین بیشتر است. در این مطالعه پرده های سینوویال و آمنیون بعنوان داربست طبیعی مورد استفاده قرار گرفت. لذا با تشکیل بافت غضروفی، داربست طبیعی ممکن است عاری از مشکلات سایر داربست های مصنوعی موجود جهت کاربردهای بالینی باشد. مواد و روش ها:کندروسیت ها بعد از جداسازی آنزیمی جهت تکثیر، کشت داده شدند. بمنظور تشكیل بافت، کندروسیت ها در لابلای لایه های پرده های سینوویال و آمنیون دسلوله قرار داده شد و بمدت 21 روز کشت داده شدند. بافت ها بعد از فیکساسیون و آماده سازی بافتی مورد بررسی با رنگ آمیزی های H&E، تولوئیدین بلو و آنتی بادی کلاژن و قرار گرفتند. بافت تشکیل شده در گروههای آزمایش با گروه كنترل که میکرومس حاصل از کشت کندروسیت ها بود مقایسه گردید. نتایج:ارزیابی ساختارهای بافتی با H&E، تشکیل بافت یکپارچه را نشان داد. تولید پروتئوگلیکان بیشتری با رنگ آمیزی تولوئیدین بلو در ساختارهای سلول- داربست نسبت به کشت های سلول بشکل میکرومس مشاهده شد. روش ایمنوهیستوشیمی نشان داد ماتریکس خارج سلولی کشت های سلول بشکل میکرومس حاوی کلاژن بیشتری نسبت به کلاژن می باشد. در ساختارهای سلول- داربست، بیان کلاژن بطور گسترده کاهش یافت و در این کشت ها نسبت به کشت های سلول بشکل میکرومس بیان کلاژن بیشتر بود., Tissue engineering is a new approach to repair cartilage lesions. Autologous Chondrocyte Transplantation (ACT) is one of the tissue engineering methods with some limitations due to expanding of chondrocytes in monolayer culture. Culturing of chondrocytes in scaffold preserves chondrocyte morphology. Extracellular matrix of natural tissues are more applicable to synthetic type of scaffolds in clinic. Therefore, in this study, the synovial membrane and amniotic membranes are used as a natural scaffold. In the case of formation cartilage tissue, natural scaffold may be free of problems to other synthetic available scaffolds for clinical applications.Materials & methods: chondrocytes after enzymatic removal, ‍ were cultured for proliferation. For tissue formation, chondrocytes were cultured between layers of decellularized synovial membrane and amniotic membranes for 21 days and examined histologically with H&E, toluidine blue and immunohistochemical staining. The construed tissues in experimental groups were compared with tissues composed of merely chondrocytes and membranes as a control group.Results: our histologic evaluation of constructs showed that tissue formation has been occurred. Proteoglycan production was observed in cell micromass cultures and cell-scaffold constructs. Immunostaining method revealed the ECM of cell micromass cultures contains higher collagen type I than higher collagen type II. In cell-scaffold constructs the expression of collagen type I extensively decreased and in this cultures collagen collagen type II expressed more than cell micromass cultures.