گونه های ساركوسیستیس جداشده از گوسفندان در كشتارگاه اردبیل به روش PCR-RFLP

Abstract

جنس¬ سارکوسیستیس از شاخه اپی¬کمپلکسا بوده و یک کوکسیدی هتروگزنوز اجباری است. تاکنون حدود 130 گونه از آن شناسایی شده است که از کوکسیدیاهای داخل سلولی تشکیل دهنده کیست با چرخه ¬زندگی و بیماریزایی متفاوت می¬باشند و توانایی ایجاد عفونت در پستانداران، پرندگان و خزندگان را دارند. به بیماری حاصل از آلودگی با این گونه¬های انگلی سارکوسیستوزیس گفته می¬شود.در این مطالعه عضلات قلب، مری و دیافراگم از 120 گوسفند کشته شده در کشتارگاه اردبیل جمع¬آوری شد و وجود گونه¬های سارکوسیستیس با استفاده از روش¬های گسترش مهری و هضم بافتی و روش PCR-RFLP تعیین گردید.روش کار و مواد: مجموعاً 120 نمونه بافتی از عضلات قلب، مری و دیافراگم جمع¬آوری شد که 60 نمونه آن حاوی كیست¬های میكروسكوپی و 60 نمونه آن حاوی كیست¬های ماكروسكوپی بود. کیست¬های میکروسکوپی با تهیه گسترش مستقیم بافتی (گسترش مهری) از نمونه¬ها و سپس رنگ¬آمیزی آنها به -وسیله ط¬ رنگ گیمسا و نیز با استفاده از روش هضم نمونه¬ها به وسیله ط¬ پپسین و در نهایت سانتریفیوژ و تهیه گسترش از رسوب و رنگ¬آمیزی آن با رنگ گیمسا تشخیص داده شد. تخلیص نمونه های DNAبا استفاده از كیت صورت گرفت. شرایط PCR برای تکثیر قطعه 18srRNAبا استفاده از پرایمر اختصاصی بهینه شد. برای بررسی اختصاصی بودن آغازگرها، نمونه¬های DNA نئوسپورا و توکسوپلاسما هم در کنار نمونه¬های سارکوسیستیس تحت مطالعه قرار گرفت. برای تعیین گونه سارکوسیست¬های تحت مطالعه، با توجه به موقعیت محلِ برشِ آنزیم¬های برش دهنده، آنزیم های TaqI،AvaI وEcoRI انتخاب شدند.نتایج: کیست¬های میکروسکوپی در6/41 درصد گسترش¬های بافتی و در 100¬درصد هضم بافتی مشاهده شدند. ارزیابی PCR-RFLP نشان داد كه كیست¬های ماكروسكوپی متعلق به ساركوسیستیس ژیگانته¬آ وکیست¬های میکروسکوپی متعلق به ساركوسیستیس آریتی¬كنیس و سارکوسیستیس تنلا است.