بررسی اثرات درمانی اسانس روغنی گیاه Cupressus sempervirens بر روی بازال سل کارسینوما (BCC) در شرایط in vitro

Abstract

بازال سل کارسینوما شایع¬ترین سرطان پوستی غیر ملانومی می¬باشد که به ویژه در افراد با سن بالا و پوست روشن و در معرض اشعه فرابنفش بیشتر دیده می¬شود. درمان استاندارد ضایعات اولیه بازال سل کارسینوما جراحی می¬باشد ولی گاهی به علت وسعت ضایعه و محل آناتومیک آنها و شرایط خاص برخی بیماران امکان جراحی وجود ندارد و باید از روش¬های غیرجراحی استفاده کرد.با توجه به وجود شواهد کافی در رابطه با اثرات ضد توموری عصاره گیاه Cupressus Sempervirens و نبود مطالعات مشابه در بیماران با کارسینوم سلول بازال در این مطالعه به بررسی اثر احتمالی این عصاره بر روی این کانسر پرداخته شده است .روش کار : در این مطالعه از 5 بیمار مبتلا به BCC که جهت جراحی به بیمارستان سینا مراجعه کرده بودند ، نمونه¬گیری جهت کشت سلولها انجام گرفت. بعد از کشت سلولی صحت کشت با فلوسیتومتری 10 CD تایید شد. و پس از پاساژ سوم مطالعات تجربی روی آنها انجام گرفت. سلول¬ها با غلظت¬های مختلفی از عصاره به مدت 48 ساعت تیمار شدند و در نهایت میزان اثر بخشی عصاره با تست MTT و بررسی آپوپتوز با روش فلوسیتومتری Annexin V-PI بررسی شد. مقدار آنزیم LDH آزاد شده در اثر نکروز سلول ها در محیط کشت نیز با کیت مخصوص اندازه گیری شد.برای بررسی بهتر تأثیر عصاره CS بر روی خاصیت تومور زایی ، آنژیو ژنز و تخریب بافتی BCC ، از اندازه گیری بیان ژن های PTCH1 ، MMP2 and9 ، VEGFوANGPT2 استفاده شد.یافته ها :در غلظت µg/ml420 عصاره گیاه CS 50% سلولهای سرطانی BCC را از بین برد (IC50= 420 µg/ml). فلوسیتومتری Annexin V-PI آپوپتوز قابل توجه سلولهای BCC تیمار شده با عصاره گیاه CS را نشان داد (p<0.05). مقدار LDH اندازه گیری شده در محیط کشت سلولهای تیمار شده با عصاره گیاه CS به طور معنی داری بیشتر از گروه کنترل بود (p=0/0005) .عصاره گیاه CS،بیان ژن های PTCH1 ، MMP2 and9 VEGFوANGPT2 را در گروه تیمار شده نسبت به گروه کنترل کاهش داد., Basal Cell Carcinoma(BCC) is the most common non melanocytic skin cancer world wide. It affects sun-exposed areas of the body specially in old and fair skin people.Surgical approaches have been used to treat BCC as standard treatment.However patients frequently present with difficult to treat BCC because of extensive or multiple lesions or condition of the patient or both. Alternative treatment methods should be consider for these patients.Cupressus Sempervirens is an orantamental plant that have been used in traditional medicine. Recently anti prolifrating and cytotoxic activity of its extract have been shown in some studies. The purpose of this study was to evaluate cytotoxic activity of this plant extract on primary cultured BCC cells.Methods: BCC tissues were obtained of five patients presented to us for surgery in Sina hospital after receiving the ethical approval and cells were isolated from these tissues in primary cultures. Cultures were confirmed by CD10 Flowcytometry and then treated at different concentration of CS extract. MTT assay (48h), LDH measurment and Annexin-V Flowcytometry were performed to evaluation. To better understand whether, CS extract could alter BCC tomorigenesis, invasive behavior and Angiogenic property, transcript levels of PTCH1, MMP2, MMP9, VEGF, ANGP2 were detected by real-time PCR method. Results: Cupressus Sempervirens extract signifivantly inhibited BCC cells viability with an IC50 of 420±0.9 µg/ml. Annexin-V-PI Flowcytometry showed CS extract can promote apoptosis in treated cells (P<0.05). LDH level in treated group was significantly higher than control group(p=0.0005). The expression of PTCH1, MMP2, MMP9, VEGF, ANGPT2 were decreased in treated cells.