بررسی اثر سایتوتوکسیک وآپوپتوتیک فراکسیون های متانولی عصاره گیاه دارویی گل میمونی شاه بیلی (scrophularia oxysepala) برروی سلول های سرطانی WEHI-164 و MCF-7

Abstract

امروزه سرطان دومین علت مرگ، پس از بیماری های قلبی در سراسر جهان است و سرطان سینه،شایعترین سرطان در میان زنان می باشد.گیاهان دارویی نقش بسزایی در درمان بیماریها از دیر باز داشته اند؛ بطوریکه بیش از 60% داروها منشاء طبیعی دارند.بنابراین پژوهشگران سالهاست در جستجوی استفاده از گیاهان جهت درمان سرطان می باشند؛ در این راه بسیاری از ترکیبات گیاهی اکنون در حال کارآزمایی بالینی برای درمان سرطان هستند.لذا در این پژوهش اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوتیک فراکسیون های متانولی عصاره گیاه Scrophularia oxysepalaمورد بررسی قرار گرفته شد.مواد و روش ها:برای بررسی اثرات سایتوتوکسیک فراکسیون های متانولیگیاه Scrophularia oxysepala تست MTT انجام گرفت. در مرحله بعد، القا آپوپتوز، با تستهای DNA Fragmentation، ELISA و تانل و میزان بیان ژنهای caspase-3 و Bcl-2، با تست Real-Time PCRبررسی شد.یافته ها:نتایج حاصل از آزمایشات MTT برای فراکسیون های عصاره متانولی گیاه نشان داد که هر چهار فراکسیون، دارای اثرات سایتوتوکسیک وابسته به غلظت بر سلول های ذکر شده می باشند؛ همچنین فراکسیون هایFa و Fb ، بیشترین اثر سایتوتوکسیک را بر سلول های سرطانی دارامی باشند. با تستهای DNA Fragmentation و تست تانل و ELISA القاء آپوپتوز در سلول های تیمار شده با عصاره نشان داده شد. به علاوه، نتایج Real-Time PCR نشان داد که میزان بیان ژن caspase-3 در سلول های سرطانی تیمار شده افزایش یافته است، در مقابل میزان بیان ژنBcl-2در آنها کاهش می یابد؛ در صورتیکه این الگو در سلول نرمال برعکس است., Cancer is one of the most prevalent diseases in the world.Natural products have played a substantial role in the treatment of disease for thousands of years. Moreover, more than 60% of all drugs are derived from natural products. Therefore investigation of different herbal components for new anti-cancer drug is one of the main research activities throughout the world .In the current study, we investigated the cytotoxicity effects of Scrophularia oxysepala methanolic sub-fractions and the underlying mechanism responsible for cell death in human breast carcinoma (MCF-7 cells) and mouse fibrosarcoma (WEHI-164 cells). Materials and Methods:Cytotoxicity of the methanolic sub-fractions of S. oxysepala was evaluated using the MTT assay. The apoptotic effects of the sub-fractions on the cells were assessed by MTT, ELISA, TUNEL and DNAfragmentation assay. Moreover, qRT-PCR was used for evaluating the expression of apoptosis-related genes, caspase-3 and Bcl-2, in treated cells.Results: MTT assay revealed that all sub-fractions significantly reduced cell viability after 24h and 36h in a dose-dependent manner; it is worth noted that Fa and Fb sub-fractions had the highest cytotoxicity, with IC50 values of 52.9 and 61.2g/mL in MCF-7 at 24h, respectively. ELISA, TUNEL and DNA fragmentation assay revealed that antiproliferative effects of all sub-fractions were associated with apoptosis on cancer cells, without any significant effect on L929 normal cells. qRT-PCR data showed that after 24h treatment with IC50 concentrations of the sub-fractions, caspase-3 expression was increased in cancer cells while the expression of Bcl-2 was decreased.