بررسی وضعیت تلومر در طی تکامل سلول¬های لنفاوی از سلول¬های بنیادی خونساز بند ناف

Abstract

تلومر یک ساختار نوکلئوپروتین در انتهای کروموزوم¬های یوکاریوتی می¬باشد و طول آن توسط آنزیم تلومراز تنظیم می¬شود. در سلول¬های تمایز یافته، تعداد توالی¬های هگزامر DNA کاهش می¬یابد و طول تلومر با هر تقسیم سلولی کم می¬شود. هدف از مطالعه حاضر بررسی اثر اینترلوکین-2، اینترلوکین-7 و اینترلوکین- 15 برروی طول تلومر و بیان آنزیم hTERT در سلول¬های تک هسته¬ایی و بنیادی خونساز بند ناف جنین (CD34+) در طول تکامل به سلول¬های لنفاوی می¬باشد.مواد و روش¬ها:سلول¬های تک هسته¬ایی با استفاده از فایکول از بند ناف جداسازی شدند. سپس به مدت 21 روز در ترکیب¬های مختلفی از سایتوکاین¬ها کشت داده شدند. طول تلومر و سطح بیان آنزیم hTERT در روز¬های 0، 7، 14 و 21 با استفاده از روش Real time PCR اندازه گیری گردید. همین کارها برای سلول¬های بنیادی خونساز بند ناف نیز صورت گرفت با این تفاوت که طول تلومر و بیان hTERT در روز¬های 0 و 21 اندازه گیری گردید.نتایج:بیشترین سطج بیان آنزیم hTERT و بیشترین طول تلومر در روز 14 مربوط به سلول-های تک هسته¬ایی در شرایطی که از اینترلوکین¬های 7 و 15 استفاده شد، مشاهده شد. همچنین همبستگی معنی داری بین طول تلومر و سطح بیان آنزیم hTERT در سلول¬های تک هسته¬ایی در روز 14 که از سایتوکاین¬های 7 و 15 استفاده شده بود، وجود داشت ((r = 0.998, p =0.04. در مقابل، اینترلوکین-2 اثر مشخصی برروی طول تلومر و بیان hTERT هم در سلول¬های تک هسته¬ایی و هم در سلول¬های بنیادی خونساز بند ناف نداشت., The telomere is a nucleoprotein complex at the end of eukaryotic chromosomes and its length is regulated by telomerase. The number of DNA repeat sequence (TTAGGG)n and telomere length is reduced with each cell division in differentiated cells. The aim of this study was to evaluate the effect of Interleukin-2, 7 and 15 on telomere length and hTERT gene expressionin mononuclear and umbilical cord blood stem cells (CD34+ cells) during development to lymphoid cells.Material and Methods: The mononuclear cells were isolated from umbilical cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Then cells were cultured for 21 days in the presence of different cytokines. Telomere length and hTERT gene expression were evaluated in freshly isolated cells, 7, 14 and 21 days of culture by real-time PCR. The same condition had been done for CD34+ cells but telomere length and hTERT gene expression were measured at initial and day 21 of the experiment.Results:Highest hTERT gene expression and maximum telomere length were measured at day14 of MNCs in the presence of IL-7 and IL-15. Also, there was a significant correlation between telomere length and telomerase gene expression in MNCs at 14 days in a combination of IL-7 and IL-15 (r = 0.998, p =0.04). In contrast, IL-2 showed no distinct effect on telomere length and hTERT gene expression in cells.