خالص سازی قطعه F(ab')2 از IgG سرم انسان و تولید و خالص سازی آنتی بادی پلی کلونال بر علیه آن در خرگوش

Abstract

در این مطالعه آنتی بادی پلی کلونال بر علیه F(ab')2به هدف استفاده در کارهای تشخیصی و تحقیقاتی تولید شد.IgG انسانی بوسیله روش کروماتوگرافی تعویض یونی خالص شد وخلوص محصول توسط روش SDS-PAGE تایید شد. IgG خالص بوسیله آنزیم پپسین هضم شد و قطعه F(ab')2 بدست آمده توسط روش ژل فیلتراسیون جداسازی شد. برای تولید آنتی بادی پلی کلونال، خرگوش، بوسیله آنتی ژن F(ab')2 ایمن سازی شد و توسط روش الایزا، تیتر آنتی بادی اختصاصی سنجیده شد.آنتی بادی تولید شده توسط روش کروماتوگرافی تعویض یونی خالص شد و توسط FITC کونژوگه شد. میزان IgG انسانی بدست آمده توسط روش کروماتوگرافی تعویض یونی 38 میلی گرم شد. باندهای مشاهده شده در SDS-PAGE در شرایط احیا به ترتیب 30-25 کیلودالتون ،50 کیلودالتون ودر شرایط غیر احیا یک باند متمایز 150 کیلودالتونی بود و همچنین در نتیجه ارزیابی خلوص قطعه F(ab')2یک باند مشخص در موقعیت 90 کیلودالتونی ویک باند 150 کیلودالتونی مشاهده شد.میزان 12 میلی گرم آنتی بادی پلی کلونال خرگوش، توسط روش کروماتوگرافی تعویض یونی خالص شد., Purified F(ab')2 can be used for animal immunization to produce polyclonal antibody. Human IgG was purified by Ion exchange chromatography method. In all stages verification method of the purified antibodies was SDS-PAGE. Purified IgG was digested by pepsin enzyme and F(ab')2 fragment was purified by Gel filtration separation method. For production of polyclonal antibody, rabbit was immunized by purified F (ab')2 and antibody production was investigated by ELISA test. Ion exchange chromatography method was used for polyclonal antibody purification. Purified anti-IgG F(ab')2 was conjugated with FITC.Ion exchange chromatography purification yielded 38 mg of human IgG antibody. The results of SDS-PAGE in reduced and non-reduced conditions showed bands with 50-KDa, 25-30 KDa MW and a distinct band with 150 KDa MW. Gel filtration separations yielded 36 mg F(ab')2 fragment. The results of reduced SDS-PAGE for determining the purity of F(ab')2 fragment showed one band in 90 KDa and a band in 150 KDa MW position. Purification by Ion exchange chromatography method resulted about 12 mg rabbit polyclonal antibody.