میزان آلودگی خاک مکان های عمومی شهر تبریز به گونه های توکسوکارا با به کارگیری روش انگل شناسی و آنالیز فایلوژنتیک مولکولی

Abstract

توکسوکاریازیس بیماری کرمی زئونوز منتقله از خاک است که باانتشار تخم های انگل توکسوکاراها به محیط از طریق مدفوع میزبانان مخزن مانند سگ و گربه ها رخ می دهد.مطالعه ی حاضر با هدف شناسایی تخم گونه های توکسوکارا در خاک پارک ها و خیابان های شهر تبریز به وسیله ی روش های انگل شناسی و آنالیز فایلوژنتیک مولکولی انجام شد.مواد و روش کار:180 نمونه خاک از پارک ها و خیابان های پنج ناحیه ی شهر تبریز (شمال، جنوب، شرق، غرب و مرکز) از اسفند 1393 تا خرداد ماه سال 1394جمع آوری گردید. پس از انجام روش های فلوتاسیون و استخراج DNA، روش های مولکولی واکنش زنجیره ای پلیمرازی تک مرحله ای (single-round PCR) وتکثیر هم دمایی به واسطه ی حلقه (LAMP) روی نمونه ها انجام شدند و در نهایت به منظور تائید دقیق گونه، نمونه ها توالی یابی و آنالیز فایلوژنتیک مولکولی شدند.نتایج: با استفاده از تکنیک های مولکولی PCR، LAMP و روش فلوتاسیون سولفات روی، میزان آلودگی نمونه های خاک به تخم گونه های توکسوکارا به ترتیب: 7/7% ، 7/42% و 6/31% شناسایی شدند.با استفاده از تکنیک LAMP میزان آلودگی خاک مناطق شهر تبریز به تخم های توکسوکارا کنیس و توکسوکارا کتی به ترتیب: 5/15% و 2/27% گزارش شد. هم چنین نمونه های تعیین توالی شده ی ژن ITS-2 توکسوکارا کنیس از نظر تنوع هاپلوتایپی پایین بوده و اندیکسFst به عنوان ضریب مهاجرت ژنی که به منظور مقایسه ی ژنتیک جمعیت های توکسوکارا کنیس بین مناطق شمال غرب و جنوب غرب ایران، به کار گرفته شد، پائین (02156/0) بود., Toxocariasis is saprozeonos helminthic disease that parasite’s eggs spread to environment by passing the feces in cats and dogs as definitive hosts. This study accomplished with target of recognition Toxocara species eggs in public parks and street soils in Tabriz city by parasitological and molecular phylogenetic analyses.Material and Methods: 180 soil samples were collected from various streets and public parks of Tabriz city (north, south, center, east and west regions) during February 2014 to June 2015. Following flotation method, the extracted DNA was conducted by single-round PCR, loop mediated isothermal amplification (LAMP) assays, Moreover, to reveal the heterogeneity trait of Toxocara species, and the amplicons samples were directly sequenced to preform the phylogenetic analysis.Results: In order ofidentifiedToxocara species, the 7.7%, 42.7%, and 31.6% of soil samples were characterized by PCR, LAMP, and ZnSo4 flotation methods. The incidence rates of T. canis and T. catiwere 15.5% and 27.2% by LAMP technique respectively. Sequenced samples were identified with low genetic diversity of ITS-2 gene for T. canisisolates.A pairwise fixation index (Fst) as a degree of gene flow was generally low (0.02156) among Toxocarapopulations of northwest and southwest Iran.