تایپینگ مولکولی و تعیین ویژگی های فنوتیپی و ژنوتیپی ایزوله های بالینی سودوموناس ائروجینوزا مقاوم به کارباپنم در شهرهای تبریز و ارومیه

Abstract

کارباپنم ها به عنوان آخرین خط درمانی عفونت هایسودوموناس ائروجینوزا مطرح می باشند. افزایش مقاومت به این آنتی بیوتیک ها باعث محدود شدن استفاده از آنها در درمان می شود. هدف از مطالعه حاضر تعیین مکانیسم های مقاومت به کارباپنم ها، تعیین الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی، مشخص کردن ارتباط اپیدمیولوژیکی با روش مولکولی و بررسیپیامد های بالینی عفونت با سودوموناس ائروجینوزامقاوم به کارباپنم می باشد. روش کار و مواد: تعداد 243 ایزوله غیر تکراری سودوموناس ائروجینوزااز هفت بیمارستان شهر های ارومیه و تبریز جمع آوری شد. ارزیابی الگوی حساسیت آنتی بیوتیکی ایزوله ها با روش های فنوتیپی انجام شد. شناسایی مکانیسم های مقاومت به کارباپنم نظیر ژنهای کارباپنماز، تولید بیش از اندازه پمپ افلاکس و AmpCو نیز کاهش بیان ژن oprDبا روش های مختلف مولکولی نظیر PCR- sequencing, Real Time PCR و روش های فنوتیپی انجام گردید. ارتباط اپیدمیولوژیکی میان ایزوله ها با روش Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD-PCR)بررسی شد.یافته ها: یکصد و شانزده ایزوله سودوموناس ائروجینوزامقاوم به کارباپنم شناسایی شد. در میان این ایزوله های مقاوم به کارباپنم به ترتیب 9/56درصد کاهش بیان oprD، 56% تولید بیش از حد پمپ افلاکس،4/28% تولید کارباپنماز و 5/15% تولید بیش از اندازه AmpCوجود داشت. روشفنوتیپیcarbapeneminactivation method (CIM)در تشخیص تولید کارباپنمازها روش خیلی ارزان و دارایویژگی بالایی بود. بیشتر سویه های MBLمثبت حاوی ژن blaIMP-1بودند که اکثراً از بخش های داخلی و ارولوژیدر شهر ارومیه جداشدند. گسترش کلون های بیشتر بر اساس نوع مکانیسم مقاومت بود مثلاً سویه هایMBLمثبت بیشتر در کلون های مشابه از بخش های مشابه جدا شدند., Carbapenem antibiotics are the last resort in treatmentof Pseudomonas aeruginosainfections. The increasing resistance rate to these compounds has limited the use of carbapenems in treatment. The aim of this study was to determine the carbapenem-resistance mechanisms,antimicrobial susceptibility of the isolates, molecular epidemiological relationship, and clinical impact ofcarbapenem-resistant P. aeruginosa (CRPA)infections.Materials and methodsA total of 243 non-duplicate P. aeruginosa clinical isolates from seven educational hospitals in Urmia and Tabriz (Northwest of Iran) were collected. Antimicrobial susceptibility tests were carried out using phenotypic methods. The carbapenem resistance mechanisms such as carbapenemase genes, Efflux pumphyperexpression, AmpC overproduction, and oprD gene down-regulation were determined by phenotypic and molecular methods. Molecular epidemiological relationship of isolates were done by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) method.ResultsOne hundred and sixteen isolates were identified as CPRPA isolates.Among the CRPA isolates, 56.9%, 56%, 28.4 % and 15.5%were identified as reduce expression oprD gene, efflux pump hyperproduction, carbapenemaseand AmpC overproduction, respectively. For phenotypic carbapenemase detection method, the very low-cost carbapenem inactivation method (CIM) showed excellent specificity.Most MBLs producer strains (blaIMP-1) were recovered from non-intensive wards from Urmia hospitals.The clonal distribution of the strains was related to carbapenem-resistance mechanisms (most of MBLs producer belong to the same clones) and the same hospital wards where the isolates were collected.