اثر تمایز میلوسیتی سلولهای رده HL-60 درهم کشتی باسلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان

Abstract

سلول‌های بنیادی مزانشیمی (MSC) سلول‌های چند قوه‌زای استرومالی هستند که میتوانند به انواع مختلفی از سلول‌ها تمایز یابند. این سلول‌ها روند هماتوپوئز را از طریق ترشح سیتوکاین‌ها، فاکتورهای رشد و بیان مولکول‌های مهم چسبندگی بین سلولی کنترل میکنند.اهداف مطالعه:این بررسی قصد دارد تا نقش سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از مغزاستخوان (BM-MSCs) در تمایز میلوسیتی رده سلولی HL-60 را از طریق بررسیهای مورفولوژیک، آنالیز فلوسیتومتریک و پروفایل بیان ژن رده مدنظر، مورد ارزیابی قرار دهد.مواد و روش کار:سلول‌های HL-60در مجاورت سلول‌های بنیادی مزانشیمی با و بدون ATRA در حضور 10درصد FBS، کشت داده شدند. پس از سه پاساژ متوالی، سلول‌های MSC تحت 30گری اشعه قرار داده شد تا قدرت تکثیر خود را از دست بدهند. جهت مقایسه میزان تمایز در هر گروه، سلول‌های HL-60 در محیط RPMI-1640 با 10درصد FBS کشت داده‏شدند. این سلول‌ها پس از سه بار پاساژ، در پلیت شش خانه کشت داده شده و با ATRA، MSCها، MSCهمراه با ATRA و یک چاهک سلول‌های HL-60 بدون تیمار، به عنوان گروه کنترل، کشت داده‏شدند. سطوح بیان ژن‌های زیر‏رده گرانولوسیتی در گروه‌های مختلف، با روش Real-Time PCR بررسی شد.نتایج:نتایج حاصل نشان دهنده حمایت BM-MSCها از تمایز گرانولوسیتیک سلول‌های رده لوسمی پرومیلوسیتیک انسانی، HL-60 بود. , Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent stromal cells that can differentiate into a variety of cell types. They control process of hematopoiesis by secreting regulatory cytokines, growth factors and expression of important cell adhesion molecules for cell-to-cell interactions. Objectives: This investigation intended to examine effect of Bone Marrow derived Mesenchymal Stem Cells (BM-MSCs) on differentiation of HL-60 cells according to morphological evaluation, flow cytometry analysis and gene expression profile. Method and Materials: BM-MSCs cultured in DMEM medium supplemented with 10% FBS. After the third passage, MSCs were irradiated by 30 Gray. To compare how HL-60 cells differentiate at different treated groups, HL-60 cells were cultured in RPMI-1640 and supplemented with 10% FBS. HL-60 cells from third passage were seeded in to six-well culture plates and treated with ATRA, MSCs, MSCs plus ATRA and one well remained as untreated HL-60 cells. Expression levels of granulocyte subset-specific genes in HL-60 cells were assayed by Real Time PCR. Results: Our results revealed that BM-MSCs support granulocytic differentiation of human promyelocytic leukemia cell line, HL-60.