سرکوب بیان ژن BACH1 با استفاده از RNA کوچک مداخلهگر (siRNA) اختصاصی، در ردهی سلولی سرطان پروستات

Abstract

مقدمه: طبق آمار سازمان جهانی بهداشت، سرطان پروستات (PC) دومین سرطان شایع تشخیص داده شده در مردان و چهارمین عامل منجر شونده به مرگ ناشی از سرطان در مردان است. اگرچه تنها 5% از بیماران که سرطان پروستات در آنها تشخیص داده شده است مبتلا به فرم متاستاتیک هستند ولی بیش از 60% کسانی که به دلیل سرطان پروستات فوت میکنند، دچار متاستاز منتشر در محل‌های دور هستند. استفاده از روش‌های متداول به منظور درمان این بیماری با محدودیت‌هایی از قبیل بروز عوارض جانبی جدی، وجود مقاومت دارویی، غیر اختصاصی بودن دارو و عود سرطان در نواحی دورتر همراه است. شناسایی تنظیم کننده های مولکولی کارآمد درگیر در فرآیند ها ی کارسینوژنز عامل بالقوه ای برای بکار رفتن به عنوان بیومارکر های تشخیصی اولیه و اهداف درمانی برای تومورهای تهاجمی هستند. ژن BACH1 فاکتور رونویسی به همین نام را کد می کند. سطوح افزایش یافته پروتئین BACH1 در سلول های سرطانی با پیشرفت تومور، تهاجم و متاستاز تومور همراه است و نتایج مطالعات نشان دهندهی افزایش بیان این پروتئین در سرطان‌های پستان متاستاز دهنده به استخوان است.هدف از این مطالعه سرکوب بیان ژن BACH1 بوسیله RNA کوچک مداخله گر siRNA)) و بررسی اثرات آن در رشد سلولی، آپوپتوز سلولی و مهاجرت در رده سلولی سرطان پروستات انسان (DU145) است.مواد و روش ها: siRNA اختصاصی BACH1 به سلول های DU145 (با روش لیپوزوم) انتقال داده شد. سطح بیان mRNA ژن های BACH1، CXCR4 و MMP1 از طریق qRT-PCR و میزان بیان پروتئین BACH1 از طریق وسترن بلات اندازه گیری شدند. میزان افزایش حساسیت و کشندگی siRNA از طریق آزمایش MTT، وضعیت آپوپتوز سلولی توسط روش TUNEL و مهاجرت به روش Scratch بررسی شد.نتایج: در سلول های DU145 به دنبال ترانسفکت siRNA BACH1 بیان ژن BACH1 و پروتئین مربوطه به صورت وابسته به دوز کاهش یافت. کاهش بیان BACH1 تاثیری روی زیست پذیری و آپوپتوز سلول های DU145 نداشت. همچنین در این مطالعه نشان داده شد که کاهش بیان BACH1 منجر به کاهش توان مهاجرت سلول های DU145 می شود., Cancer lethality is mainly caused by metastasis. Therefore, understanding the nature of the genes involved in this process has become a priority. We hypothesized that BACH1 may be mediating metastatic behavior in prostate cancer and knockdown of BACH1 would reduce this property of prostate cancer.Methods: BACH1 was knocked down using siRNA in androgen insensitive prostate cancer DU145 cells and as confirmed by real-time PCR and western blotting. The cytotoxic effects of BACH1 siRNA, on DU145 cells were determined using MTT assay. The rule of BACH1 in migration of DU145 cells was examined by scratch wound healing assay. We also evaluated CXCR4 and MMP1 expression by qRT-PCR to determine which pathway is involved in migration of prostate cancer.Results: In DU145 cells after transfection with specific siRNA, BACH1 expression was significantly reduced in both mRNA and protein levels in time and dose dependent manner. More importantly, we showed that BACH1 mediate the metastatic pathway, as by knockdown the BACH1 we can significantly prevent migration of DU145 cells.