اثر سلولهای بنیادی مزانشیمی مغز استخوان برتمایز منوسیتی سلولهای U937

Abstract

سلول های بنیادی مزانشیمی (MSCs)، پیش ساز سلول های استرومال مغز استخوان، از جمله سلول های مهم ریز محیط (Niche) سلول های بنیادی خونساز (HSCs)محسوب می شوند. این سلول ها از طریق ترشح سایتوکاین های تنظیم گر ، فاکتورهای رشد و بیان مولکول های چسبندگی مهم جهت تماس سلول-سلول، فرآیند خونسازی را کنترل می کنند.از آنجایی که نقش سلول های مختلف ریز محیط مغزاستخوان بر تمایز سلول های بنیادی خونساز به طور واضح مشخص نیست، نقش سلول های MSC بعنوان پیش ساز ترکیبات سلولی ریز محیط مغزاستخوان حائز اهمیت می باشد. در این مطالعه اثر سلول های بنیادی مزانشیمی مغزاستخوان بر روی تمایز منوسیتی سلول های U937 بررسی گردید.مواد و روش کار:سلول های U937 بهمراه سلول های بنیادی مزانشیمی و هم چنین در محیط کاندیشن مدیوم (C.M) حاصل از سلول های MSC مستقیما کشت داده شدند. در این مطالعه از ویتامین D3بعنوان القاگر تمایز منوسیتی جهت تیمار سلول های U937 استفاده گردید و مورفولوژی سلول های تیمار شده با آن توسط رنگ آمیزی رایت-گیمسا و میکروسکوپ نوری مورد بررسی قرار گرفت. پس از 24 ساعت، مارکر تمایز منوسیتی CD14 توسط فلوسیتومتری و بیان ژن های منوسیتی توسط روش real time polymerase chain reaction (RT PCR) مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج:آنالیز فلوسیتومتری افزایش بیان مارکر CD14سلول های U937را در هم کشتی با MSCsو C.M نشان داد که بیان مارکر CD14 سلول های U937در هم کشتی با MSCs نسبت به C.M افزایش بیشتری داشت. ارزیابی بیان 10 ژن منوسیتی نشان داد ژن های CD14, CXCR4, CXCL8, CXCL2, CSF2RA افزایش معناداری نسبت به گروه کنترل داشتند. , Mesenchymal stem cells (MSCs), precursors of diversebone marrow stromal cells, are key components of the hematopoietic stem cells (HSCs) niche. They control the process of hematopoiesis by secreting regulatory cytokines, growth factors and expression of important cell adhesion molecules for cell-to-cell interactions.In this research, we have investigated the effect of bone marrow derived MSCs on monocytic differentiation of U937 cells line.Materials and Methods:U937 cells were cultured in both direct co-culture with MSCs and MSCs conditioned medium (C.M) driven. This study used 1,25-dihydroxyvitamin D3(Vit D3) as inductor of monocyticdifferentiation andU937 cells treated with Vit D3morphology was examined by Wright Giemsa staining and light microscopy. After 24 hours,CD14 monocytic differentiation marker was measured by flow cytometryand monocytic gene expression was assessed by real time polymerase chain reaction (RT PCR).Results:The results of flow cytometric analysis showed that CD14 expression of U937 increased in co-cultured cells with MSCs and conditioned medium. The higher effect of MSCs co-culture on CD14 expression in U937 cells was observed, compared to the conditioned medium.Screening of the ten selected genes expression level, revealed that CD14, CXCR4,CXCL8, CXCL2, and CSF2RA genes had significant alteration compared to the control group.