اثر هیپوکسی برپرولیفراسیون، مرگ سلولی و مارکرهای سطحیU937 بر بستر سلولهای مزانشیمی خون بندناف

Abstract

Introduction: Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of rare progenitor cells that were originally identified in the bone marrow stroma, where they regulate key stages of hematopoiesis. Hematopoietic stem cells (HSCs) and MSCs are found in a specialized regulatory environment or niche in bone marrow contain low level of oxygen. Effect of low oxygen concentration on U937 proliferation and viability in co-culture with MSCs derived from umbilical cord blood (UCB) was evaluated. The goal of this study is evaluation effect of low oxygen concentration on U937 proliferation and viability in co-culture with MSCs derived from umbilical cord blood (UCB). Methods: U937 cultured in UCB-MSCs derived conditioned medium (C.M) or directly co-cultured with UCB-MSCs. For inducing hypoxic condition, different concentrations of CoCl2 were used. Viability induced by different concentrations of H2O2. Proliferation rate and apoptosis analyzed by MTT assay and flowcytometry, respectively. Additionally RT-PCR for investigation of expression of some surface markers (CD49d, CD11a, CD14, CD116, and CD54) on hypoxic cells and control performed. Result: Our study confirmed that UCB-MSCs support U937 proliferation in normoxic and hypoxic condition and neutralize negative effect of hypoxia on cell proliferation whereas in the presence of conditioned medium proliferation rate didnt change. Flowcytometry results showed that effect of H2O2 on cell death was reduced in UCB-MSCs. Resistance to H2O2 induced cell death was observed in hypoxic condition. Similar to proliferation assay data from C.M not meaning full. We observed that expression of CD11a, CD14, and CD54 were without change but CD116 expression increase in hypoxia. Also CD49d expression in U937 was reduced in co-culture with UCB-MSCs., هدف از این مطالعه ارزیابی تاثیر غلظت پایین اکسیزن بر تکثیر و حیات و مارکرهای سطحی سلولهای U937 در همکشتی با سلولهای مزانشیمی مشتق از خون بند ناف (UCB-MSCs) می باشد.مواد و روش کار:سلولهای U937 در C.M مربوط به UCB-MSCs و در همکشتی مستقیم با آنها کشت داده شد. برای القای شرایط هایپوکسی، غلظتهای متفاوتCoCl2 استفاده شد. مرگ سلولی نیز بوسیله غلظتهای متفاوت H2O2 القا شد. میزان تکثیر و مرگ سلولی بوسیله آزمایشMTT و فلوسایتومتری بترتیب بررسی شدند. علاوه بر این RT-PCR برای بررسی بیان تعدادی از مارکرهای سطحی(CD49d, CD11a, CD14, CD116,CD54) بر روی سلولهای هایپوکسیک و کنترل انجام شد.یافته ها:مطالعه ما ثابت کرد کهUCB-MSC از تکثیر سلولهای U937 در شرایط هایپوکسی و نرموکسی حمایت کرده و اثر مهارکنندگی هایپوکسی بر تکثیر سلولها را می کاهد، در حالیکه در حضورC.M تغییری در میزان تکثیر مشاهده نشد. نتایج فلوسایتومتری هم نشان داد که اثرات H2O2 در مرگ سلولی بوسیلهUCB-MSC کاهش می یابد. مقاومت به مرگ سلولی ناشی از H2O2 در شرایط هایپوکسیک مشاهده شد. مشابه تکثیر سلولی در این زمینه نیز C.M تغییر معنل داری را نشان نداد. همچنین ما مشاهده کردیم که بیانCD11a, CD14, CD54 تغییری نداشت ولی بیانCD116 افزایش نشان داده بود. همچنین بیانCD49d در سلولهای U937 کشت داده شده با UCB-MSC کاهش یافته بود